中山大学生物化学考研复习笔记资料(2)

本站小编 免费考研网/2015-10-13


B—DNA、A-DNA(右手双螺旋, RNA-RNA、RNA-DNA 杂交分子具有这种结构。A-DNA 是否存在于细胞内还不确定。大多数短DNA 结晶时倾向于形成A 型)、Z-DNA(Z-DNA 在原核和真核生物中都存在。Z-DNA 在调节基因的表达或者遗传重组方面可能起重要的作用) 
拓扑异构酶:此酶能改变DNA 拓扑异构体的L 值。①拓扑异构酶酶I(拧紧)②拓扑异构酶酶II(拧松) 
2. RNA 的结构
真核 mRNA: polyA、5’-帽子帽子 
原核mRNA(多顺反子):原核mRNA 由先导区、插入序列、翻译区和末端序列组成。没有5/帽子和3/polyA。5’端先导区中,有SD 序列。SD 序列和核糖体16S 的rRNA的3’末端富含嘧啶碱基的序列互补,这种互补序列与mRNA 对核糖体的识别有关。 
tRNA 的结构 :tRNA 约占全部RNA 的15%。每种tRNA 可运载一种特定的氨基酸,一种氨基酸可由一种或多种tRNA 运载。 
rRNA 的结构:rRNA 占总RNA 的80%左右、功能、真核原核剪切过程。
3. UV 吸收 
鉴定纯度:纯DNA 的A260/A280 应为1.8(1.65-1.85),若大于1.8,表示污染了RNA。纯RNA 的A260/A280 应为2.0。若溶液中含有杂蛋白或苯酚,则A260/A280 比值明显降低。 
含量计算: OD260=1,值相当于:50ug/mL 双螺旋DNA;或:40ug/mL 单螺旋DNA(或RNA);或:20ug/mL 核苷酸。 
增色效应与减色效应:增色效应:在DNA 的变性过程中,摩尔吸光系数增大;减色效应:在DNA 的复性过程中,摩尔吸光系数减小。
4. 核酸杂交 
杂交(DNA—DNA、 DNA—RNA):将不同来源的DNA 混合加热,变性后,慢慢冷却使它复性。若这些异源DNA 之间,在某些区域有相同的序列,则复性时会形成杂交分子。 
Southern Bloting、Nothern Bloting
5. DNA 中的一些碱基会被甲基化修饰 
DNA 的甲基化:A/C 更容易甲基化,需要甲基化酶;S-腺苷甲硫氨酸是甲基供体;通过甲基化区分自身DNA 和外源DNA;标记错配碱基以进行修复;真核生物甲基化在CpG序列中常见。抑癌基因高甲基化减弱基因的表达、原癌基因低甲基化增强基因的表达。
6. 核酸的分离提纯 
DNA 的分离三种方法:①用盐抽提,用苯酚和氯仿除去蛋白质。②用广谱蛋白酶在SDS 存在下保温消化cell 悬液,再用苯酚和氯仿去蛋白,用RNase 除去少量RNA。③用氯化铯密度梯度离心法分离纯化DNA。 
RNA 的分离 :①所有器皿与溶液都要经过处理除去RNase;②在破碎细胞的同时加入强变性剂使RNase 失活;③在实验反应体系中加入RNase 的抑制剂(如DEPC)。常用的分离方法:①用胍盐/氯化铯密度梯度离心 ;②用酸性胍盐/苯酚/氯仿抽提mRNA 所采用Oligo(dT)亲和层析法过柱。
7. 核酸含量的测定 
紫外分光光度法、定磷法、定糖法
8. 核酸的凝胶电泳 
琼脂糖凝胶电泳:①迁移率:超螺旋 DNA >线型DNA >开环DNA。 ②用于分析RNA 时,须加入蛋白质变性剂,如甲醛等。(使RNase 变性)。 ③EB 染色。 
聚丙烯酰胺凝胶电泳(分辨率高):一般直接用来分析RNA,可分析相对分子质量小于100bp 的DNA 片段和RNA。
9. 核酸的扩增(PCR) 
polymerase chain reaction、基本步骤、注意事项、影响特异性的因素、PCR 的主要用途、几种重要的PCR 衍生技术
10. 核酸的限制性酶切
II 型酶的限制和修饰活性分开,蛋白质结构是单一成分,辅助因子Mg2+,位点为反向重复序列。
同裂酶:来源不同的限制酶(名称自然不同),识别同样的核苷酸靶序列,产生同样的切割,形成同样的末端。 
星号活力:在一定条件下(低离子强度,碱性pH,或50%甘油),限制酶的特异性降低。结果,它的识别与切割所需的典型的核苷酸序列的数量和种类会发生变化。 
1.4 糖和糖生物学 
1. 单糖 
单糖的环状结构:在溶液中,含有 4 个以上碳原子的单糖主要以环状结构。 
在溶液中,糖的链状结构和环状结构之间可以相互转变,最后达到一个动态平衡,称为变旋现象。
只有链状结构才具有下述的氧化还原反应:(1)Molish 反应( 鉴定单糖的存在)(2)Seliwannoff 反应(区分酮糖与醛糖)、能被弱氧化剂(如Fehling 试剂、Benedict 试剂)氧化的糖称为还原性糖)、糖脎反应(单糖在加热条件下与过量苯肼反应产物称为糖脎)
所有的单糖都是还原性糖。人体不能消化L-葡萄糖。
2. 寡糖 
还原性寡糖:麦芽糖、乳糖、纤维二糖
非还原性寡糖:蔗糖、海藻糖、棉籽糖 
3. 多糖和杂多糖 
直链淀粉:α-(1-4)糖苷键依次相连成长而不分开的葡萄糖多聚物。遇碘显兰色。 
支链淀粉:在直链的基础上每隔20-25 个葡萄糖残基就形成一个(1-6)支链。遇碘显紫色。 
淀粉酶:α-淀粉酶可以催化淀粉分子中任何部位的α-1,4-糖苷键水解,产物主要是糊精和麦芽糖;β-淀粉酶从链的还原端开始,每次从淀粉分子中水解两个葡萄糖基,产物为极限糊精和麦芽糖
糖原:结构更紧密,更适应其贮藏功能,这是动物将其作为能量贮藏形式的一个重要原因,另一个原因是它含有大量的非原性端,可以被迅速动员水解。糖元遇碘显红褐色。
4. 糖蛋白 
糖蛋白中糖链的结构: N-糖苷键型(N-连接)和O-糖苷键型(O-连接) 
1.5 脂类和生物膜 
1. 脂肪酸及其衍生物 
类二十烷酸(类花生酸):包括前列腺素类,凝血恶烷类和白细胞三烯类,是花生四烯酸的衍生物。花生四烯酸可由亚油酸在体内合成。  前列腺素类:
前列腺素类是花生四烯的衍生物。阿司匹林抑制前列腺素合成酶的环加氧酶活性,从而抑制前列腺素的合成。 
2. 磷脂 
甘油磷脂、鞘氨醇磷脂。
 3. 结合脂 
糖脂:脑苷脂(中性糖鞘脂类)、神经节苷酯(酸性糖鞘脂类);脂蛋白:血浆脂蛋白。 
鞘糖脂中,单糖、双糖或寡糖通过O-糖苷键与神经酰胺相连,重要的鞘糖脂有脑苷脂、硫脑苷脂和神经节苷脂。 
血浆脂蛋白包括:(1)乳糜微粒,运输甘油三酯和胆固醇脂,从小肠到组织肌肉和脂肪组织。(2)极低密度脂蛋白VLDL,在肝脏中生成,将脂类运输到组织中,当VLDL被运输到全身组织时,被分解为三酰甘油、脱辅基蛋白和磷脂,最后,VLDL 被转变为低密度脂蛋白。(3)低密度脂蛋白LDL,把胆固醇运输到组织,经过一系列复杂的过程,LDL 与LDL 受体结合并被细胞吞食。(4)高密度脂蛋白HDL,也是在肝脏中生成,可能负责清除细胞膜上过量的胆固醇。
4. 固醇类化合物 
固醇类:含有环戊烷多氢菲母核的一类醇、酸及其衍生物。包括:固醇、固醇衍生物。 
胆固醇:胆固醇是生物膜的重要成分,羟基极性端分布于膜的亲水界面,母核及侧链深入膜双层,控制膜的流动性,阻止磷脂在相变温度以下时转变成结晶状态,保证膜在低温时的流动性及正常功能。胆固醇是合成胆汁酸、类固醇激素、维生素D 等生理活性物质的前体。
类固醇激素:(1)肾上腺皮质激素 (2)性激素
5. 生物膜 
流动镶嵌模型:流动性和不对称性 
胆固醇:变相温度以上,降低膜的流动性;变相温度以下,保持膜的流动性。生理条件下,胆固醇含量越高,膜的流动性越低。在生理条件下增加胆固醇的含量会降低膜的流动性。
膜蛋白在膜上的定位:外周膜蛋白、内在膜蛋白
糖类:全部分布在膜的非细胞质一侧。  影响流动性的三个重要因素:脂肪酸碳链长短、脂肪酸的饱和程度、胆固醇的含量; 膜脂的流动性主要决定于磷脂分子。
6. 物质转运 
初级主动运输、二级主动运输 
2 .动态生化-生物能学和代谢
2.1 糖酵解途径和已糖的分解代谢 
1. 糖酵解途径  糖酵解:葡萄糖分解为丙酮酸并伴随着生成ATP 的过程。存在于所有生物。在真核细胞中,其反应部位在胞液中。是第一个被阐明的代谢途径 
(1)葡萄糖磷酸化形成G-6-P:此反应基本不可逆,调节位点。催化此反应的激酶有,已糖激酶和葡萄糖激酶。己糖激酶是酵解途径中第一个调节酶,被产物G-6-P 强烈地别构抑制。己糖激酶是一种调节酶,ADP 和反应产物葡萄糖-6-磷酸是该酶的变构抑制剂。
(2)G-6-P 异构化为F-6-P 
(3)F-6-P 磷酸化,生成F-1.6-P:酵解中的关键步骤。磷酸果糖激酶是糖酵解的限速酶。肝中的磷酸果糖激酶受ATP 的抑制, H+对该酶有抑制作用。通过阻止糖酵解的继续进行,从而防止乳酸的继续形成,避免酸中毒。 
(4)F-1.6-P 裂解成3-磷酸甘油醛和磷酸二羟丙酮(DHAP):该反应在热力学上不利,但是,由于具有非常大的△G0 负值的F-1.6-2P 的形成及后续甘油醛-3-磷酸氧化的放能性质,促使反应正向进行。同时在生理环境中,3-磷酸甘油醛不断转化成丙酮酸,驱动反应向右进行。该反应由醛缩酶催化。
(5)磷酸二羟丙酮(DHAP)异构化成3-磷酸甘油醛
(6)3-磷酸甘油醛氧化成1.3—二磷酸甘油酸 
(7)1.3—二磷酸甘油酸转化成3—磷酸甘油酸和ATP:由磷酸甘油酸激酶催化。这是酵解过程中的第一次底物水平磷酸化反应,也是酵解过程中第一次产生ATP 的反应。
(8)3—磷酸甘油酸转化成2—磷酸甘油酸 
(9)2—磷酸甘油酸脱水生成磷酸烯醇式丙酮酸 
(10)磷酸烯醇式丙酮酸生成ATP 和丙酮酸:不可逆,调节位点。由丙酮酸激酶催化,丙酮酸激酶是酵解途径的第三个调节酶,这是酵解途径中的第二次底物水平磷酸化反应,磷酸烯醇式丙酮酸将磷酰基转移给ADP,生成ATP 和丙酮酸
2. 丙酮酸的去路 
有氧条件:乙酰辅酶 A(三羧酸循环)
无氧条件:乳酸发酵、生成乙醇 
高等动物糖酵解-乳酸发酵途径的生理意义:缺氧条件下迅速为生命活动提供能量的途径,尤其对肌肉收缩更为重要。是机体某些组织获能或主要获能的方式,如视网膜、神经、癌组织等。成熟红细胞几乎完全依赖糖酵解供应能量。 
乙醇发酵:一些酵母和其它微生物在无氧条件下,丙酮酸先后经丙酮酸脱羧酶和乙醇脱氢酶的催化作用,脱羧还原为乙醇。(脊椎动物缺乏丙酮酸脱羧酶)TPP 是丙酮酸脱羧酶的辅酶
3. 糖酵解途径的调节 
1)磷酸果糖激酶:糖酵解途径最重要的调控点,受高浓度ATP/柠檬酸抑制。 
2)丙酮酸激酶:变构抑制剂:ATP、丙氨酸(肝);变构激活剂:果糖-1,6-双磷酸。 
3)己糖激酶、葡萄糖激酶
4. 糖酵解与癌症和进化 
肿瘤组织糖酵解速度比正常组织快还是慢?为什么? 
糖酵解与进化:糖酵解途径被认为是生物最古老最原始获取能量的一种方式。在进化过程中,大多数较高等生物,虽然进化为利用有氧条件进行生物氧化获取大量的自由能,但仍保留了这种原始方式。糖酵解的十步反应,不但成为生物体共同经历的葡萄糖的分解代谢前期途径,以及供氧不足时的供能途径,而且在哺乳动物一些组织细胞中,葡萄糖酵解途径是唯一的供能途径。
5. 戊糖磷酸途径 
以葡萄糖-6-磷酸开始,在葡萄糖-6-磷酸脱氢酶催化下形成6-磷酸葡萄糖酸,进而代谢生成磷酸戊糖作为中间代谢产物,故将此过程称为戊糖磷酸途径。 
生理意义 :产生NADPH 和核糖-5-磷酸。也是植物光合作用从CO2 合成葡萄糖的部分途径。 NADPH 的主要功能:作为供氢体参与体内多种生物合成反应;是谷胱甘肽还原酶的辅酶;参加肝脏生物转化反应;参与体内嗜中性粒细胞及巨噬细胞在吞噬细菌后产生超氧阴离子的反应,有杀菌作用。 
葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症:简称G6PD 缺乏症,又称蚕豆病(溶血性贫血症)。是一种遗传病。 红细胞在一些因素的诱发下溶解,血红蛋白释放到血液中,引起黄疸和肾功能障碍。诱发因素包括:进食蚕豆、抗疟疾药物、磺胺类抗生素以及接触一些除草剂。
6. 四种贫血病比较: 

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