七、翻译
1、病毒virus 2、类病毒viroid 3、艾滋病病毒HIV 4、细菌bacteria
第三章 细胞生物学研究方法
本章要点：本章对细胞生物学的一些研究方法作了简要介绍。要求学生重点掌握细胞形态结构的观察方法（主要是光学显微镜、电子显微镜），细胞培养、细胞工程的基本技术，了解细胞组分的分析方法。
一、名词解释
1、分辨率 2、细胞培养 3、细胞系 4、细胞株 5、原代细胞培养 6、传代细胞培养 7、细胞融合 8、单克隆抗体
二、填空题
1、光学显微镜的组成主要分为 、 和 三大部分，光学显微镜的分辨率由 、 和 三个因素决定。
2、荧光显微镜是以 为光源，电子显微镜则是以 为光源。
3、倒置显微镜与普通光学显微镜的不同在于 。
4、电子显微镜按工作原理和用途的不同可分为 和 。
5、电镜超薄切片技术包括 、 、 、 等四个步骤。
6、细胞组分的分级分离方法有 、 和 。
7、利用超速离心机对细胞组分进行分级分离的常用方法有 和 。
8、电子显微镜使用的是 透镜，而光学显微镜使用的是 透镜。
9、杂交瘤是通过 和 两种细胞的融合实现的，由此所分泌的抗体称为 。
10、观察活细胞的内部结构可选用 显微镜，观察观察细胞的形态和运动可选用 显微镜，观察生物膜的内部结构可采用 法。
11、体外培养的细胞，不论是原代细胞还是传代细胞，一般不保持体内原有的细胞形态，而呈现出两种基本形态即 和 。
三、选择题
1、由小鼠骨髓瘤细胞与某一B细胞融合后形成的细胞克隆所产生的抗体称（ ）。
A、单克隆抗体 B、多克隆抗体 C、单链抗体 D、嵌合抗体
2、要观察肝组织中的细胞类型及排列，应先制备该组织的（ ）
A、滴片 B、切片 C、涂片 D、印片
3、提高普通光学显微镜的分辨能力，常用的方法有（ ）
A、利用高折射率的介质（如香柏油）B、调节聚光镜，加红色滤光片
C、用荧光抗体示踪 D、将标本染色
4、适于观察培养瓶中活细胞的显微镜是（ ）
A、荧光显微镜 B、相差显微镜 C、倒置显微镜 D、扫描电镜
5、观察血细胞的种类和形态一般制备成血液（ ）
A、滴片 B、切片 C、涂片 D、印片
6、冰冻蚀刻技术主要用于（ ）
A、电子显微镜 B、光学显微镜 C、微分干涉显微镜 D、扫描隧道显微镜
7、分离细胞内不同细胞器的主要技术是（ ）
A、超速离心技术 B、电泳技术 C、层析技术 D、光镜技术
8、利用差速离心法可从动物组织匀浆中分离出下列哪种细胞器（ ）
A、溶酶体 B、细胞核 C、线粒体 D、质膜
9、Feulgen反应是一种经典的细胞化学染色方法，常用于细胞内（ ）
A、蛋白质的分布与定位 B、脂肪的分布与定位
C、DNA的分布与定位 D、RNA的分布与定位
10、要探知细胞内某一蛋白质的表达水平，可通过（ ）实现。
A、Southern 杂交 B、Northern 杂交 C、Western杂交 D、免疫荧光技术
11、流式细胞术可用于测定（ ）
A、细胞的大小和特定细胞类群的数量 B、分选出特定的细胞类群
C、细胞中DNA、RNA或某种蛋白的含量 D、以上三种功能都有
12、真核细胞和原核细胞的最主要区别是（ ）。
A、真核细胞具有完整的细胞核 B、原核细胞无核糖体
C、质膜结构不同 D、细胞形状不同
13、直接取材于机体组织的细胞培养称为（ ）。
A、 细胞培养 B、原代培养 C、 传代培养 D、细胞克隆
14、 扫描电子显微镜可用于（ ）。
A、获得细胞不同切面的图像 B、观察活细胞
C、定量分析细胞中的化学成分 D、观察细胞表面的立体形貌
15、建立分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞是通过下列技术构建立（ ）。
A、细胞融合 B、核移植 C、病毒转化 D、基因转移
16、适于观察无色透明活细胞微细结构的光学显微镜是（ ）。
A相差显微镜 B、暗视野显微镜 C、普通光学显微镜 D、偏振光学显微镜
17、动物细胞在体外培养条件下生长情况是（ ）。
A、能无限增殖 B、不能增殖分裂很快死亡 C、经过有限增殖后死亡 D、一般进行有限增殖后死亡，但少数情况下某些细胞发生了遗传突变，获得无限增殖能力
18、细胞融合首先采用的技术是（ ）介导的融合。
A、化学试剂 B、病毒 C、电融合 D、融合仪
19、细胞培养时，要保持细胞原来染色体的二倍体数量，最多可传代培养（ ）代。
A、10~20 B、40~50 C、20~30 D、90~100
20、正常细胞培养的培养基中常需加入血清，主要是因为血清中含有（ ）。
A、氨基酸 B、核酸 C、生长因子 D、维生素
21、cDNA是指（ ）。
A、细菌环状的DNA分子 B、质粒环状的DNA分子
C、tRNA的DNA拷贝 D、mRNA的DNA拷贝
22、在杂交瘤技术中，筛选融合细胞时常选用的方法是（ ）。
A、密度梯度离心法 B、荧光标记的抗体和流式细胞术
C、采用在选择培养剂中不能存活的缺陷型瘤系细胞来制作融合细胞
D、让未融合的细胞在培养过程中自然死亡
23、动物的正常细胞在体外培养条件下的生长行为是（ ）。
A、能无限增殖 B、在有充分营养条件下，能无限增殖
C、不能无限增殖，其增殖代数与物种和供体年龄有关
24、从胎儿肺得到的成纤维细胞可在体外条件下传50代，而从成人肺得到的成纤维细胞可在体外条件下传20代，这主要是因为（ ）。
A、胎儿的肺成纤维细胞没有完全分化 B、体内细胞生长环境在胎儿和成人不同
C、成人的肺成纤维细胞受到凋亡因子的影响 D、细胞增殖能力是受到年龄限制的
25、在普通光镜下可以观察到的细胞结构是（ ）。
A、核孔 B、核仁 C、溶酶体 D、核糖体
四、判断题
1、亚显微结构就是超微结构。（ ）
2、光学显微镜和电子显微镜的差别在于后者的放大倍数远远大于前者，所以能看到更小的细胞结构。（ ）
3、荧光显微镜技术是在光镜水平，对特异性蛋白质等大分子定性定位的最有力的工具。广泛用于测定细胞和细胞器中的核酸、氨基酸、蛋白质等。（ ）
4、生物样品的电子显微镜分辨率通常是超薄切片厚度的十分之一，因而切得越薄，照片中的反差越强，分辨率也越高。（ ）
5、细胞株是指在体外培养的条件下，细胞发生遗传突变且带有癌细胞特点，有可能无限制地传下去的传代细胞。（ ）
6、透射或扫描电子显微镜不能用于观察活细胞，而相差或倒置显微镜可以用于观察活细胞。（ ）
7、酶标抗体法是利用酶与底物的特异性反应来检测底物在组织细胞中的存在部位。（ ）
8、光镜和电镜的切片均可用载玻片支持。（ ）
9、体外培养的细胞，一般仍保持机体内原有的细胞形态。（ ）
10、细胞冻存与复苏的基本原则是快冻慢融。（ ）
11、多莉的培育成功说明动物的体细胞都是全能的。（ ）
五、简答题
1、超薄切片的样品制片过程包括哪些步骤？
2、荧光显微镜在细胞生物学研究中有什么应用？
3、比较差速离心与密度梯度离心的异同。
4、为什么电子显微镜不能完全替代光学显微镜？
5、相差显微镜在细胞生物学研究中有什么应用？
6、比较放大率与分辨率的含义。
7、扫描隧道显微镜具有哪些特点？
六、论述题
1、试比较电子显微镜与光学显微镜的区别。
七、翻译
1、cell line 2、cell strain 3、cell culture 4、cell engineering 5、cell fusion
6、primary culture cell 7、subculture cell 8、monoclonal antibody、
第三章参考答案
一、名词解释
1、分辨率：区分开两个质点间的最小距离。
2、细胞培养：把机体内的组织取出后经过分散（机械方法或酶消化）为单个细胞，在人工培养的条件下，使其生存、生长、繁殖、传代，观察其生长、繁殖、接触抑制、衰老等生命现象的过程。
3、细胞系：在体外培养的条件下，有的细胞发生了遗传突变，而且带有癌细胞特点，失去接触抑制，有可能无限制地传下去的传代细胞。
4、细胞株：在体外一般可以顺利地传40—50代，并且仍能保持原来二倍体数量及接触抑制行为的传代细胞。
5、原代细胞培养：直接从有机体取出组织，通过组织块长出单层细胞，或者用酶消化或机械方法将组织分散成单个细胞，在体外进行培养，在首次传代前的培养称为原代培养。
6、传代细胞培养：原代培养形成的单层培养细胞汇合以后，需要进行分离培养（即将细胞从一个培养器皿中以一定的比率移植至另一些培养器皿中的培养），否则细胞会因生存空间不足或由于细胞密度过大引起营养枯竭，将影响细胞的生长，这一分离培养称为传代细胞培养。
7、细胞融合：两个或多个细胞融合成一个双核细胞或多核细胞的现象。一般通过灭活的病毒或化学物质介导，也可通过电刺激融合。
8、单克隆抗体：通过克隆单个分泌抗体的B淋巴细胞，获得的只针对某一抗原决定簇的抗体，具有专一性强、能大规模生产的特点。
二、填空题
1、光学放大系统，照明系统，机械和支架系统；光源的波长，物镜的镜口角，介质折射率。
2、紫外光；电子束。
3、物镜和照明系统的位置颠倒。
4、透射电镜，扫描电镜。
5、固定，包埋，切片，染色。
6、超速离心法，层析法，电泳法。
7、差速离心法，密度梯度离心法。
8、电磁，玻璃。
9、（小鼠骨髓）瘤细胞，B淋巴细胞；单克隆抗体。
10、相差显微镜；暗视野显微镜；冰冻蚀刻。
11、成纤维样细胞，上皮样细胞。
三、选择题
1、A，2、B，3、A，4、C，5、C，6、A，7、A，8、B，9、C，10、C，11、D，12、A，
13、B，14、D，15、A，16、A，17、C，18、B，19、B，20、C，21、D、22、C，23、C，24、D，25、D。
四、判断题
1、×，2、×，3、√，4、×，5、×，6、√，7、×，8、×，9、×，10、√，11、×。
五、简答题
1、超薄切片的样品制片过程包括哪些步骤？
答案要点：固定，包埋，切片，染色。
2、荧光显微镜在细胞生物学研究中有什么应用？
答案要点：荧光显微镜是以紫外线为光源，照射被检物体发出荧光，在显微镜下观察形状及所在位置，图像清晰，色彩逼真。
荧光显微镜可以观察细胞内天然物质经紫外线照射后发荧光的物质（如叶绿体中的叶绿素能发出血红色荧光）；也可观察诱发荧光物质（如用丫啶橙染色后，细胞中RNA发红色荧光，DNA发绿色荧光），根据发光部位，可以定位研究某些物质在细胞内的变化情况。
3、比较差速离心与密度梯度离心的异同。
答案要点：二者都是依靠离心力对细胞匀浆悬浮扔中的颗粒进行分离的技术。差速离心是一种较为简便的分离法，常用于细胞核和细胞器的分离。因为在密度均一的介质中，颗粒越大沉降越快，反之则沉降较慢。这种离心方法只能将那些大小有显著差异的组分分开，而且所获得的分离组分往往不很纯；而密度梯度离心则是较为精细的分离手段，这种方法的关键是先在离心管中制备出蔗糖或氯化铯等介质的浓度梯度并将细胞匀浆装在最上层，密度梯度的介质可以稳定沉淀成分，防止对流混合，在此条件下离心，细胞不同组分将以不同速率沉降并形成不同沉降带。
4、为什么电子显微镜不能完全替代光学显微镜？
答案要点：电子显微镜用电子束代替了光束，大大提高了分辨率，电子显微镜相对光学显微镜是个飞跃。但是电子显微镜：样品制备更加复杂；镜筒需要真空，成本更高；只能观察“死”的样品，不能观察活细胞。光学显微镜技术性能要求不高，使用容易；可以观察活细胞，观察视野范围广，可在组织内观察细胞间的联系；而且一些新发展起来的光学显微镜能够观察特殊的细胞或细胞结构组分。因此，电子显微镜不能完全代替光学显微镜。
5、相差显微镜在细胞生物学研究中有什么应用？
答案要点：相差显微镜通过安装特殊装置（如相差板等）将光波通过样品的光程差或相差位转换为振幅差，由于相差板上部分区域有吸光物质，使两组光线之间增添了新的光程差，从而对样品不同同造成的相位差起“夸大作用”，样品表现出肉眼可见的明暗区别。相差显微镜的样品不需染色，可以观察活细胞，甚至研究细胞核、线粒体等到细胞器的形态。
6、比较放大率与分辨率的含义。
答案要点：二者都是衡量显微镜性能的指标。通常放大率是指显微镜所成像的大小与样本实际大小的比率；而分辨率是指能分辨或区分出的被检物体细微结构的最小间隔，即两个点间的最小距离。放大率对分辨率有影响，但分辨率不仅仅取决于放大率。
7、扫描隧道显微镜具有哪些特点？
答案要点：①高分辨率：具有原子尺度的高分辨率本领，侧分辨率为0.1~0.2nm，纵分辨率可达0.001nm；②直接探测样品的表面结构：可绘出立体三维结构图像；③可以在真空、大气、液体（接近于生理环境的离子强度）等多种条件下工作；④非破坏性测量：由于没有高能电子束，对表现没有破坏作用（如辐射、热损伤等），能对生理状态下的生物大分子和活细胞膜表面的结构进行研究，样品不会受到损伤而保持完好；⑤扫描速度快，获取数据的时间短，成像快。
六、论述题
1、试比较光学显微镜与电子显微镜的区别。
答案要点：光学显微镜是以可见光为照明源，将微小的物体形成放大影像的光学仪器；而电子显微镜则是以电子束为照明源，通过电子流对样品的透射或反射及电磁透镜的多级放大后在荧光屏上成像的大型仪器。它们的不同在于：
①照明源不同：光镜的照明源是可见光，电镜的照明源是电子束；由于电子束的波长远短于光波波长，因而电镜的放大率及分辨率显著高于光镜。
②透镜不同：光镜为玻璃透镜；电镜为电磁透镜。
③分辨率及有效放大本领不同：光镜的分辨率为0.2μm左右，放大倍数为1000倍；电镜的分辨率可达0.2nm，放大倍数106倍。
④真空要求不同：光镜不要求真空；电镜要求真空。
⑤成像原理不同：光镜是利用样品对光的吸收形成明暗反差和颜色变化成像；而电镜则是利用样品对电子的散射和透射形成明暗反差成像。
⑥生物样品制备技术不同：光镜样品制片技术较简单，通常有组织切片、细胞涂片、组强压片和细胞滴片等；而电镜样品的制备较复杂，技术难度和费用都较高，在取材、固定、脱水和包埋等环节上需要特殊的试剂和操作，还需要制备超薄切片。
七、翻译
1、细胞系 2、细胞株 3、细胞培养 4、细胞工程 5、细胞融合 6、原代细胞
7、传代细胞 8、单克隆抗体
第四章 细胞膜与细胞表面
本章要点：本章阐述了细胞膜的基本结构特征及其生物学功能，生物膜的结构模型及膜的化学组成；重点阐述了细胞连接的结构类型、特点及功能，并对细胞外基质的组成、分子结构及生物功能进行了简单介绍。要求重点掌握生物膜的结构模型、化学组成和功能特点；重点掌握细胞连接的基本类型、结构特点及主要功能。
一、名词解释
1、生物膜 2、脂质体 3、双型性分子（兼性分子） 4、内在蛋白 5、外周蛋白 6、细胞外被 7、细胞连接 8、紧密连接 9、桥粒 10、膜骨架
11、血影 12、间隙连接 13、细胞粘附分子 14、细胞外基质
二、填空题
1、细胞膜的最显著特性是 和 。
2、细胞膜的膜脂主要包括 、 和 ，其中以 为主。
3、成熟的红细胞是研究细胞质膜的好材料，不仅没有细胞核，也没有 。
4、动物细胞间的连接主要有 、 、 和 四种形式。
5、细胞间隙连接的基本单位叫 ，由 组成，中间有一个直径为 nm的孔道。
6、构成动物细胞外基质的主要成分是 、 、 和 。
7、胶原的基本结构单位是 ，其肽链的结构特点是 。
8、蛋白聚糖是由 和核心蛋白的 残基共价连接形成的巨分子。糖胺聚糖的结构单位是 。
9、膜骨架蛋白主要成分包括 、 、 和 等。
