2006-2008年中国药科大学考研微生物复试试题

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06年微生物复试试题

一, 名词解释(每题3分,共30分)

1,芽孢某些细菌，特别是G+杆菌，生长到一定阶段，在细胞内形成一个圆形或椭圆形的、折光性强的特殊结构称为芽孢。
2,外毒素,内毒素,类毒素
外毒素—细菌细胞在生长繁殖过程中分泌到胞外培养液中的毒性蛋白，主要由G+细菌产生。
内毒素是G-细菌细胞壁成分中的脂多糖，细菌自溶或裂解后，脂多糖释放出来。
类毒素一些经变性或经化学修饰而失去原有毒性而仍保留其抗原性的毒素。
3,广谱抗生素
抗菌范围广泛的抗生素，不仅能强力抑制大部分革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌，而且能抑制立克次体、螺旋体和某些原虫
4,TD-Ag 胸腺依赖性抗原——在刺激 B 细胞产生抗体时需要 T 细胞的辅助，所以称为 TD-Ag 。（分子量大，表面多重抗原决定簇、可诱生多类Ig、可诱发体液和细胞免疫、课引起记忆反应。）
5,肿瘤特异性抗原    癌细胞形成与正常细胞不同的特有物质时,则该物质称为肿瘤特异性抗原(TSA)。是指一种肿瘤细胞特有的，不存在于正常组织细胞上的抗原。
6 ,膜攻击复合体

7 ,T辅助细胞
8 、菌落   细胞受固体培养基表面或深层的限制，故不能像在液体培养基中那样自由扩散，因此繁殖的菌体常聚集在一起，形成了肉眼可见的细胞集落。
9、转化（transformation）是某一基因型的细胞从周围介质中吸收来自另一基因型的细胞的DNA而使它的基因型和表型发生相应变化的现象。
10 ,

二,简答题(每题8分,共40分)
1,简述并图示霉菌的生活史
孢子开始，经过发芽、生长成为菌丝体，再由菌丝体经过无性和有性繁殖最终又产生孢子。

2,配制培养基时应注意哪些基本原则?
1、选择适宜的营养物质以满足微生物的营养需要
2、控制营养物质的浓度并注意各营养物的比例
3、调节微生物生长所需的适宜PH
4、灭菌处理并维持无菌状态。

3,质粒有哪些基本特性?
质粒通常指细菌细胞内染色体外，能自主复制的遗传物质，共价、闭合、环状、双链的DNA分子，有超螺旋和开环式。
质粒的基本特征：①能自主复制②不相容性③所携带基因不是细胞生长所必需的④能以宿主细胞自发消除⑤可以从一个细菌转到另一个细菌。

4,机体的抗病毒免疫有哪些方面?
抗病毒免疫
病毒突破人体第一道防线后，干扰素和自然杀伤细胞（NK细胞）在第二道防线中占重要地位。

病毒进入机体后，能刺激人体的巨噬细胞、淋巴细胞以及体细胞产生干扰素。干扰素具有广谱抗病毒作用，它能诱生抗病毒白蛋白来阻断新病毒的产生，故有阻止病毒增殖和扩散作用。NK细胞是淋巴细胞中除T细胞、B细胞外的另一类细胞，它们占淋巴细胞总数的5-10%，一刻不停地在血循环中承担着“巡逻”任务。一旦发现有不正常的细胞，立即能释放穿孔素等将它们杀死。被病毒感染的宿主细胞属不正常细胞，因此亦在NK细胞攻击范围之内。

病毒逃脱了第二道防线抵御后，就面临第三道防线。这就是特异性体液免疫和细胞免疫。它们在对抗病毒感染中各有特定作用。特异性抗体可以中和存在于宿主细胞外的病毒。抗体与病毒结合后，病毒就不能与易感染细胞表面的相应受体结合而进入细胞，并且随后这些抗体和病毒的结合物就被吞噬细胞吞噬降解。对已进入易感染细胞的细胞内病毒，像胞内菌一样，抗体进不去，需要细胞免疫中的CD8 CTL细胞完成清除任务。CTL细胞破坏“藏”有病毒的感染细胞的过程是，首先CTL细胞与病毒感染细胞靠近并相互接触，然后CTL细胞放出穿孔素、粒酶等生物活性物质，再后CTL细胞离开，最后病毒感染细胞破裂死亡，释出的病毒则可被特异性抗体中和消灭。攻击被病靖腥鞠赴腃TL细胞离开后，还能以同样方式多次攻击其他感染细胞

5,简述Ames实验的基本原理及方法.
鼠伤寒沙门氏菌（Salmonella typhimurium）的组氨酸营养缺陷型（his－）菌株，在含微量组氨酸的培养基中，除极少数自发回复突变的细胞外，一般只能分裂几次，形成在显微镜下才能见到的微菌落。受诱变剂作用后，大量细胞发生回复突变，自行合成组氨酸，发育成肉眼可见的菌落。某些化学物质需经代谢活化才有致变作用，在测试系统中加入哺乳动物微粒体酶①，可弥补体外试验缺乏代谢活化系统之不足。鉴于化学物质的致突变作用与致癌作用之间密切相关，故此法现广泛应用于致癌物的筛选。
斑点试验吸取测试菌增菌培养后的菌液0.1ml，注入融化并保温45℃左右的上层软琼脂中，需S9活化的再加0.3ml－0.4mlS9mix，立即混匀，倾于底平板上，铺平冷凝。用灭菌尖头镊夹灭菌圆滤纸片边缘，纸片浸湿受试物溶液，或直接取固态受试物，贴放于上层培养基的表面。同时做溶剂对照和阳性对照，分别贴放于平板上相应位置。平皿倒置于37℃温箱培养48h。在纸片外围长出密集菌落圈，为阳性；菌落散布，密度与自发回变相似，为阴性。

．平板掺入试验将一定量样液和0.1ml测试菌液均加入上层软琼脂中，需代谢活化的再加0.3ml－0.4ml S9mix，混匀后迅速倾于底平板上铺平冷凝。同时做阴性和阳性对照，每种处理做3个平行。试样通常设4个～5个剂量。选择剂量范围开始应大些，有阳性或可疑阳性结果时，再在较窄的剂量范围内确定剂量反应关系。培养同上。同一剂量各皿回变菌落均数与各阴性对照皿自发回变菌落均数之比，为致变比（MR）。MR值≥2，且有剂量-反应关系，背景正常，则判为致突变阳性。

三, 问答题(共80分)
1、实验证明细菌对青霉素的耐药性，如何证明耐药性是由质粒介导的？,(10分)
   利用溶菌酶和表面活性剂作用,破坏细胞壁中的糖肽层,同时使细胞膜崩解,此时细菌的染色体可以形成卷曲状折叠结构,附着在细胞膜碎片上,随后经过沸水浴快速作用,是蛋白迅速凝固将染色体包裹,离心除去,质粒DNA存在于上清中,加入无水乙醇,在-20℃放置30min,析出.琼脂糖凝胶电泳,确定质粒DNA.取一斜面菌,培养过夜,取0.5ml到新鲜M9培养基,培养2h,离心,冷的灭菌生理盐水洗涤,沉淀加GaCl2制得感受态菌液,取0.1ml加入0.1ml已稀释的DNA,冰浴30min.随即放入42℃水4min,冰浴1h,加入2VM9培养液,37表达2h,适当稀释,取0.1ml涂布于含氨苄青霉素和四环素的完全固体培养基上.同时取不加DNA的菌液及DNA,在相应的平板上对照,37培养。感受态菌如果生长良好，表示质粒DNA上有耐药性基因。

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