革兰氏染色的方法及原理：
原理：由于不同细菌细胞壁化学成分不同，而引起的物理性状的差别是导致革兰氏染色反应不同的原因。通过结晶紫初染和碘液媒染，在任何细菌的细胞膜内部都可形成不溶于水的结晶紫—碘的复合物。G+细菌因壁厚，肽聚糖网的层次多和结构致密，以及不含类脂等原因，故用脱色剂（乙醇）处理后，可把结晶紫—碘复合物仍阻拦在细胞内，故呈现紫色；反之，G-细菌细胞壁薄，外膜层类脂含量高（脂多糖、脂蛋白），以及肽聚糖层薄且交联松散，故用脱色剂乙醇处理后，就可把类脂和晶紫—碘复合物溶出细胞，这种无色的细胞再经番红（沙黄）复染，就呈现红色。
方法：细胞涂片——结晶紫初染——碘液媒染——乙醇脱色——番红复染——观察
糖被在实际工作中的应用意义：
细菌糖被与人类的科学研究和生产实践有密切的关系：
①糖被的有无及其性质的不同可用于菌种鉴定，例如某些具有难以观察到的微荚膜的致病菌，只要用极为灵敏的血清学反应即可鉴定；
②在制药工业和试剂工业中，人们可以从肠膜明串珠菌的糖被中提取葡聚糖以制备“代血浆”或葡聚糖生化试剂；
③利用野油菜黄单胞菌的粘液层可提取十分有用的胞外多糖——黄原胶，它可用于石油开采中的钻井液添加剂，也可用于印染、食品等工业中；
④产生菌胶团的细菌在污水的微生物处理过程中具有分解、吸附和沉降有害物质的作用。
第四章  微生物的营养
鉴别、选择培养基及基本原理：
鉴别培养基：是用于鉴别不同类型微生物的培养基。
基本原理：在培养基中加入某种特殊化学物质，某种微生物在培养基中生长后能产生某种代谢产物，而这种代谢产物可以与培养基中的特殊化学物质发生特定的化学反应，产生明显的特征性变化，根据这种特征性变化，可将该种微生物与其它微生物区分开来。
选择培养基：用来将某种或某类微生物从混杂的微生物群体中分离出来的培养基。
基本原理：根据不同种类微生物的特殊营养需求或对某种化学物质的敏感性不同，在培养基中加入相应的特殊营养物质或化学物质，抑制不需要的微生物的生长，有利于所需微生物的生长。
培养基的配制方法和注意事项：
配制方法：1、称量2、溶解3、调PH4、过滤5、分装6、加棉塞7、包扎8、灭菌9、摆斜面10、无菌检查
注意事项：称量药品的牛角匙不要混用，称完药品应及时盖紧瓶盖；
          调PH时要小心操作，避免多次回调；
          不同培养基各有配制特点，要注意具体操作；
        分装过程中注意不要使培养基沾在管（瓶）上，以免污染过的棉塞再引起试剂污染。
培养基的配制原则：
1）选择适宜的营养物质2）营养物质浓度与配比合适3）控制氧化还原电位4）控制PH条件5）原料来源选择（容易获得且成本低）6）灭菌处理
如何灭菌培养基：
对培养基一般采取高压蒸汽灭菌，一般用0.013MPa，121.3℃15-30min可达到灭菌目的。
培养基中各成份的主要功能：
A:碳源：1)提供碳素构成有机分子骨架，碳源物质通常也提供氢、氧元素；2）提供能源（二氧化碳不能提供能源）。
B：氮源：1）提供氮素合成含氮物质；2）一般不作为能源（少数自养菌能用作能源）。
C：无机盐：酶活性中心组分；2）稳定生物大分子及细胞结构；3）调节渗透压；4）控制氧化还原电位；5）某些微生物能源物质。
D：生长因子：1）维生素、嘌呤和嘧啶作为酶的辅基或辅酶；2）提供某些微生物不能合成的氨基酸；3）嘌呤和嘧啶用于合成核苷、核苷酸及核酸。
E：水：1）溶剂与运输介质；2）参与生化反应；3）维持生物大分子结构；4）热导体；5）维持细胞形态；6）控制多亚基结构的装配与解离。
培养基常用凝固剂：
常用的凝固剂有琼脂、明胶和硅胶。
微生物营养类型及代表菌：
按碳源、能源及电子供体划分
营养类型    碳源    能源    电子供体    举例
光能无机自养型    CO2    光    无机物    藻、蓝细菌、紫硫细菌、绿硫细菌
光能有机异养型    有机物（也可利用CO2）    光    有机物    紫色非硫细菌、绿色非硫细菌、常生活在被污染湖泊或河流中
化能无机自养型    CO2    化学能（无机物）    无机物    硝化细菌、氢细菌、铁细菌、硫氧化细菌、在生态系统物质循环过程中其重要作用
化能无机异养型    有机物    化学能（有机物）    有机物    真菌、原生动物、大多数非光合细菌、致病菌在本质上都属于此类
营养物质的吸收方式：
运输方式    特点    运输物质
扩散    运输动力来自细胞膜内外被运输物质的浓度差    H2O、CO2、O2等
促进扩散    运输动力来自细胞膜内外被运输物质的浓度差，需要载体    氨基酸、单糖、维生素、无机盐、甘油等
主动运输    需要细胞提供能源，可逆浓度运输    单糖、双糖、氨基酸、有机酸，以及H+、Cl+、Na+、K+等离子
膜泡运输    细胞膜内陷包裹营养物质，主要存在于变形虫等真核微生物中    各种营养物质
微生物营养物质包括哪些？有什么功能？
种类    碳源    氮源    无机盐    生长因子    水
生理作用    ①提供碳素构成有机分子骨架，碳源物质通常也提供氢元素和氧元素