水平的调控、转录水平的调控、转录后水平的调控、翻译水平的调控、翻译后水平的调控）

进行基因表达调控。③真核生物中有选择性剪接，原核没有。④原核的基因表达主要受环境

等调控，真核是受激素等调控。

6．PCR与细胞内DNA复制的异同

相同点：原料都是四种脱氧核苷酸、模板、都需要引物、都是单链DNA，都遵循碱基互补

配对原则。不同点：PCR技术 DNA生物复制环境体外复制，加热，90摄氏度左右体内，温

和的环境酶主要是DNA聚合酶、DNA解旋酶，DNA聚合酶，引物酶 DNA连接酶等各种酶引物需要人工合成的引物自己合成引物成分步骤变性--退火--延伸解旋-

起始-延伸-结束

8．复制，转录，翻译，调控中的各种保守序列及其功能

⑴复制

Ori:原核生物复制起点 ARS: 真核生物复制起点 ⑵转录

启动子：决定转录方向及模板链 、转录效率 操纵子（原核）：将转录与翻译相耦联 终止子：终止转录 ⑶翻译

SD序列：原核生物翻译起始，SD序列的顺序及位置对翻译都有影响。 Kozak序列：真核生物翻译起始 ⑷调控

转录水平调控：

增强子：作用于启动子，提高转录活性 沉默子：作用于启动子，降低转录活性

9．乳糖操纵子和色氨酸操纵子(包括的衰减子)的工作原理

答：⑴乳糖操纵子

乳糖操纵子是个弱启动子，包括３个结构基因：Ｚ、Ｙ和Ａ，以及启动子、控制子和阻遏子等。

乳糖操纵子负控诱导模式：无诱导物时，LacⅠ基因转录产生阻遏物单体，结合形成同源四体，Lac同源四体与操纵区（O区）DNA相结合，阻遏基因转录。基因不表达。当有诱导物时，诱导物使LacⅠ变成不能与O区相结合的非活化形式，RNA聚合酶就可以与Lac启动子区相结合，起始转录基因。mRNA被转录成三个蛋白质，即贝塔-半乳糖苷酶、贝塔-半乳糖苷透过酶、贝塔-半乳糖苷乙酰基转移酶。（（图解）乳糖操纵子是个弱启动子，在葡萄糖和乳糖都存在的情况下，大肠杆菌利用葡萄糖，是因为葡萄糖可降低cAMP浓度，阻碍其与CAP结合，而cAMP-CAP是激活Lac的重要组成部分，Lac启动子表达受阻，就没有贝塔-半乳糖苷酶活性。不能利用乳糖。所以说lac操纵子强的诱导作用既需要乳糖又需缺乏葡萄糖） ⑵色氨酸操纵子

色氨酸操纵子调控作用主要有三种方式:阻遏作用、弱化作用以及终产物Trp 对合成酶的反馈抑制作用。

①阻遏作用:trp操纵子转录起始的调控是通过阻遏蛋白实现的。在有高浓度Trp存在时,阻遏蛋白- 色氨酸复合物形成一个同源二聚体,并且与色氨酸操纵子紧密结合,因此可以阻止转录。当Trp 水平低时,阻遏蛋白以一种非活性形式存在,不能结合DNA。在这样的条件下, trp操纵子被RNA聚合酶转录,同时Trp 生物合成途径被激活。

②弱化作用: trp操纵子转录终止的调控。在trp operon,前导区的衰减子有4段特殊的序列，可形成不依赖ρ因子的转录终止信号（衰减子的工作机理：碱基序列(即衰减子)包括4个分别以1、2、3和4表示的片段,能以两种不同的方式进行碱基配对, 1 - 2和3 -4配对,或2 - 3配对, 3 - 4配对区正好位于终止密码子的识别区。前导序列有相邻的两个色氨酸密码子,当培养基中Trp 浓度很低时,负载有Trp 的tR2NATrp也就少,这样翻译通过两个相邻色氨酸密码子的速度就会很慢,当4区被转录完成时,核糖体滞留1区,这时的前导区结构是2 - 3配对,不形成3 - 4配对的终止结构,所以转录可继续进行。反之,核糖体可顺利通过两个相邻的 色氨酸 密码子,在4区被转录之前,核糖体就到达2区,这样使2 - 3不能配对, 3 - 4 区可以配对形成终止子结构, 转录停止。）

③终产物Trp 对合成酶的反馈抑制作用 由于基因表达必然消耗一定的能源和前体物,相对于阻遏和弱化作用,反馈抑制作用更为经济和高效。

三．分析题

1．SDS-PAGE和双向电泳的原理

①SDS-PAGE是利用SDS(带负电)和还原剂破坏蛋白的高级结构, 同时SDS与蛋白定量结合, 消除蛋白之间的电荷差异,使得蛋白的迁移率主要依赖分子量 (分子小跑得快) .加上不连续

电泳，即上层为浓缩胶,可将样品压缩到同一起跑线, 下层为分离胶; 可获得更高的分辨率.再用考马斯亮蓝进行染色.即可进行蛋白分子量

的测定、蛋白浓度的测定、蛋白的鉴定。②双向电泳是蛋白质组学中对蛋白质组进行研究的主要分离方法，同时能分离成百上千种蛋白质。蛋白质在第一向根据电荷的不同（等电聚焦），第二向根据分子量的不同进行分离（SDS-PAGE）。分离后对蛋白质进行染色，根据实际分析情况，分别进行考马斯亮兰染色、银染或荧光染色。

2．顺式作用元件工作的原理

答：顺式作用元件，包括启动子、增强子、调控序列和可诱导元件。要与反式作用因子作用，才能促进基因表达，而反式作用因子在DNA水平和转录水平上作用，且具有组织特异性。

3．DNA序列与蛋白功能（表型）非线形关系

答：①基因具有强大的容错机制②密码子的简并性，即使DNA错配发生在编码区也不会影响蛋白的表达。③真核生物存在不表达蛋白的内含子④基因间隔区、非编码区等变异，不引起蛋白的变化。⑤变异发生在蛋白质的非功能区，不影响蛋白质的功能。

4．PCR的原理，包括它的特异性

答：以dNTP为反应原料，靶序列为模板，按碱基配对与半保留复制原理，合成一条新的与模板DNA链互补的半保留复制链重复循环变性--退火--延伸三过程，就可获得更多的“半保留复制链”。关于特异性是①引物设计的特异性，使引物能和模版上的特定片段配对，在最优条件下特异扩增。②退火温度的不合适，也会出现非特异条带（假阳性）。

5．Western blot的原理，包括二抗工作的原理

答：利用抗原抗体特异性结合，再用二抗作为探针去检测蛋白。即先用SDS-PAGE得到蛋白1，通过转膜，再用蛋白1的Ab1（一抗）与之结合，再用带着HRP的Ab2（二抗）去识别一抗。再显色检测结果。