美国的美国标准细胞库或细胞银行（ATCC）和人遗传突变细胞库（HGMR），细胞衰老细胞库（CAR）等。

4-6  细胞培养

细胞培养是动物细胞工程的重要技术基础，细胞培养包括天然培养基和合成培养基，天然培养基主要来自动物体液或从组织分离提纯制备的，营养成分高，但是成分复杂，来源有限，合成培养基是根据天然培养基的成分，用化学物质模拟合成的，

细胞培养包括原代培养和传代培养，原代培养是指细胞或组织离开有机体之后的首次培养，培养到细胞生长到一定密度后就需要更新培养液，这就是细胞的传代培养，

细胞培养的方法通常有：悬滴培养法，培养瓶培养法，和旋转管培养法。

4-7  动物的细胞与组织培养是从动物体内取出组织或细胞，模拟有机体内生理条件，在体外建立无菌，适温和一定营养条件等，使之生长和生存，并维持其结构和功能的技术，动物细胞和组织培养的动物细胞工程的重要技术基础，细胞融合，组织工程，胚胎工程，动物克隆等都离不开细胞的培养，

4-8  培养细胞的生长特点

细胞的生长特点有：贴附，接触抑制，密度依赖性等。

接触抑制：是体外培养中某些贴附型细胞生长特征之一，当两个细胞由于移动而相互靠近发生接触时，细胞不在移动，在接触区域的细胞膜皱褶样活动停止，从而使细胞停止运动，这种由于细胞接触而抑制细胞运动的现象称为接触抑制。

密度抑制：当细胞密度进一步增大，培养液中营养成分减少，代谢产物增多，细胞因为营养的枯竭和代谢物的影响，则发生密度抑制，导致细胞分裂停止。

4-9细胞培养常用的液体

【1】水【2】平衡盐溶液【3】消化液【4】消化酶抑制液【5】PH调整液;常用的有碳酸氢钠溶液和HEPES溶液【6】抗生素液【7】谷氨酰胺补充液

4-10原代培养的过程：原代培养就是初次培养，是从供体获取组织后的首次培养，过程一般包括：取材——培养材料的制备——接种——加培养液——培养

4-11传代培养的过程：传代培养分为第一次传代和常规传代两种方法。第一次传代，当原代培养的细胞生长到一定的阶段时，可以进行第一次传代，通常取决于原代培养方法，培养物的细胞活性，细胞类型和特点，接种的细胞密度，培养条件。

常规传代：【1】贴壁细胞的消化传代法，【2】悬浮细胞传代

5-1 简述单克隆抗体的制备过程及其主要原理。

动物免疫、细胞融合、选择杂交细胞、检测抗体、杂交瘤细胞的克隆化、单克隆抗体的大量产生几个步骤。

免疫小鼠注射特定的抗原蛋白                培养骨髓溜细胞

           ↓                                    ↓

       B淋巴细胞                             骨髓瘤细胞

             ↘                                ↙

                           融合

                             ↓

                          杂交细胞

                             ↓

                         筛选杂交细胞（抗体检验）

                             ↓

                       克隆能产生抗体的阳性细胞

↓

在克隆阳性细胞

                 ↙                               ↘

         注射小鼠                               体外培养

            ↓                                     ↓

        单克隆抗体                              单克隆抗体

5-2 HAT的选择原理是什么？

HAT培养基是根据细胞由次黄嘌呤核苷酸和嘧啶核苷酸合成DNA途径而设计的。

5-3细胞融合的定义

细胞融合是又称体细胞杂交或细胞杂交，是指在离体条件下用人工的方法将不同的生物或同种生物不同类型的单细胞通过无性方式融合成一个杂合细胞的技术。细胞融合技术的出现标志着细胞工程的诞生。

5-4  细胞融合的核心过程？（P82）

6-1  胚胎工程的概念：

胚胎工程是在胚胎移植的技术上发展起来的现代生物技术，主要包括体外受精技术，胚胎移植技术，胚胎分割技术，胚胎冷冻保存技术和性别控制技术。

6-2  体外受精

体外受精：是指哺乳动物的精子和卵子在体外人工控制的环境中完成受精过程的技术。它的基本原理是人工模拟体内环境，包括温度，湿度，营养，气体，渗透压，PH等，使卵丘卵母细胞复合体中的初级卵母细胞成熟，同时使精子获能，完成受精。

6-3体外受精技术

卵母细胞的采集和成熟培养；

【1】超数排卵，从活体卵巢中采集卵母细胞；从屠宰后母畜卵巢上采集卵母细胞；

【2】卵母细胞的选择，【3】卵母细胞的成熟培养

精子的获能处理；体外受精【1】常规的体外受精技术【2】与分离精子相结合的体外受精技术【3】显微受精技术。受精卵的体外培养；胚胎移植。

7-1干细胞的定义

干细胞是一类具有自我更新和分化潜能的细胞，根据其发育阶段，干细胞可分为胚胎干细胞和成体干细胞，按照分化的潜能的大小，可以将干细胞分为全能干细胞，多能干细胞，定向干细胞。

7-2成体干细胞的类型

成体干细胞是分布在成体组织中尚未分化的，具有自我更新，并能构建和补充相应组织的各种类型细胞潜能的干细胞，分为：造血干细胞，神经干细胞，胰岛干细胞，皮肤干细胞。

7-3  组织工程

组织工程是指应用工程学和生命科学的原理和方法来研究正常或病理状况下的哺乳动物组织的结构功能和生长的机制，研究开发能够修复，维持或改善损伤组织的人工生物替代物的一门学科。

8-1 简述细胞核移植的发展史，讨论“多莉”羊产生的学术意义？

1952年Briggs和King发明了细胞核移植技术，首次把两栖泪囊体胚的细胞核移植到去核卵中，发育成为可摄食的蝌蚪

1997年，英格兰爱丁堡罗斯林研究所和PPL制药公司利用高度分化的绵羊乳腺上皮细胞，通过核移植克隆了一只雌性小绵羊——多莉

它是人类首次用成年的体细胞——乳腺上皮细胞获得的克隆后代，证明了哺乳动物高度分化的细胞核在卵母细胞质的支持下也能够恢复其全能性，为细胞的全能性增加了新的实验证据。

8-2简述细胞核移植的类型和主要的操作技术？

【1】胚胎细胞核移植技术【2】干细胞核移植技术【3】体细胞核移植技术

操作技术：【1】核受体细胞的准备【2】核供体细胞的准备【3】细胞核移植【4】激活【5】重组胚的体内或体外培养【6】胚胎移植

8-3 核移植技术的应用？

【1】制备基因克隆动物，进行生物药物的生产【2】培育优良畜种，扩大良种种群【3】开展异种动物克隆，拯救濒危动物【4】与干细胞技术结合。开展治疗性克隆【5】利用核移植技术，研究生物学的基本问题。

9-1什么是转基因动物？

指在基因组内稳定地整合外源基因，并且外源基因可以稳定地遗传给后代的基因工程动物。

9-2简述转基因动物的制备方法，分析比较几种方法的原理与特点。