酶        DNA-pol校读功能        RNA-pol无校读功能
引物        需要        不需要
产物        子代DNA        各种RNA，转录初始产物是三种RNA前体
特点        半保留复制        不对称转录
加工修饰        无        有；转录初始产物→成熟RNA



将染色体的目的基因克隆到载体（如质粒）进行表达，主要过程
1、目的基因的获取：化学合成、基因组DNA文库、cDNA文库、PCR
2、克隆载体的选择与构建：为携带和表达目的外源DNA而采用的一些DNA分子称克隆载体，其中插入外源DNA可转录翻译成多肽链的称表达载体。常用的载体包括：质粒DNA、噬菌体DNA、病毒DNA
*3、外源基因与载体的连接：粘性末端连接、平端连接、同聚物加尾连接、人工接头连接
4、重组DNA导入受体菌：转化、转染、感染
问答22分
列举三种特殊DNA序列并说明生物学功能
端粒：真核生物染色体DNA分子末端特殊结构，短GC丰富的序列以及蛋白质组成。
作用：1）维持染色体的稳定性；2）维持DNA复制的完整性。
四膜虫TTGGGG/AACCCC脊椎动物TTAGGG/AATCCC
-35区TTGACA序列是RNA-pol中σ亚基识别并结合的位点；
-10区有TATAAT序列-Prinbow盒，因富含AT而DNA双链易分离，利RNA-pol发挥作用，为RNA-pol与DNA模板结合的部位。
Hogness盒：真核生物转录起始上游保守序列5’TATA序列
2003级五年制生化期末考试大题
名词解释（3分/题）：
1、HGP
2、质粒细菌中，独立于染色体外的双链闭环DNA分子，用于克隆几千bp外源DNA片段。基因工程常用载体--能将外源目的DNA导入受体细胞，并能自我复制增至的工具；
现常用的质粒经人工改造，有多种限制酶切点。
5、cDNA以mRNA为模板，利用反转录，合成的互补cDNA，在复制成双链cDNA
6、不对称转录两方面含义，一是DNA分子双链上一股链作为模板指引转录，另一股不转录；二是模板链并不总在同一单链上。
简答题（6分/题）：
1、乳糖操纵子的结构和功能。
*乳糖操纵子（Lac operon）结构

控制区：调节基因I-编码阻遏蛋白，CAP结合位点，启动序列P（其CAP结合位点位于RNA聚合酶结合位点上游）和操纵基因O；
I基因→阻遏蛋白→O序列→阻遏RNApol
结构基因：β-半乳糖苷酶基因lacZ\通透酶基因lacY\乙酰基转移酶-lacA。
低乳糖时，lac操纵子处于阻遏状态，机制：
启动序列PI→调节基因I→阻遏蛋白→操纵序列O
→阻遏RNApol结合启动序列P，从而抑制转录启动；
将染色体的目的基因克隆到载体（如质粒）进行表达，主要过程
1、目的基因的获取：化学合成、基因组DNA文库、cDNA文库、PCR
2、克隆载体的选择与构建：为携带和表达目的外源DNA而采用的一些DNA分子称克隆载体，其中插入外源DNA可转录翻译成多肽链的称表达载体。常用的载体包括：质粒DNA、噬菌体DNA、病毒DNA
*3、外源基因与载体的连接：粘性末端连接、平端连接、同聚物加尾连接、人工接头连接
4、重组DNA导入受体菌：转化、转染、感染
问答22分
列举三种特殊DNA序列并说明生物学功能
端粒：真核生物染色体DNA分子末端特殊结构，短GC丰富的序列以及蛋白质组成。
作用：1）维持染色体的稳定性；2）维持DNA复制的完整性。
四膜虫TTGGGG/AACCCC脊椎动物TTAGGG/AATCCC
-35区TTGACA序列是RNA-pol中σ亚基识别并结合的位点；
-10区有TATAAT序列-Prinbow盒，因富含AT而DNA双链易分离，利RNA-pol发挥作用，为RNA-pol与DNA模板结合的部位。
Hogness盒：真核生物转录起始上游保守序列5’TATA序列
2003级五年制生化期末考试大题
名词解释（3分/题）：
1、HGP
2、质粒细菌中，独立于染色体外的双链闭环DNA分子，用于克隆几千bp外源DNA片段。基因工程常用载体--能将外源目的DNA导入受体细胞，并能自我复制增至的工具；
现常用的质粒经人工改造，有多种限制酶切点。
5、cDNA以mRNA为模板，利用反转录，合成的互补cDNA，在复制成双链cDNA
6、不对称转录两方面含义，一是DNA分子双链上一股链作为模板指引转录，另一股不转录；二是模板链并不总在同一单链上。
简答题（6分/题）：
1、乳糖操纵子的结构和功能。
*乳糖操纵子（Lac operon）结构

控制区：调节基因I-编码阻遏蛋白，CAP结合位点，启动序列P（其CAP结合位点位于RNA聚合酶结合位点上游）和操纵基因O；
I基因→阻遏蛋白→O序列→阻遏RNApol
结构基因：β-半乳糖苷酶基因lacZ\通透酶基因lacY\乙酰基转移酶-lacA。
低乳糖时，lac操纵子处于阻遏状态，机制：
启动序列PI→调节基因I→阻遏蛋白→操纵序列O
→阻遏RNApol结合启动序列P，从而抑制转录启动；
4、半保留复制的实验证明。
用N15标记大肠杆菌DNA的实验：将大肠杆菌放在含15NH4Cl的培养基中培养若干代后，DNA全部被标记15N，密度大于正常14N-DNA；
将N15标记大肠杆菌DNA放在14NH4Cl中培养，分代提取，发现第一代只位于重带；第二代出现中带、轻带各一半；随着不断培养，重带被稀释，轻带比例越来越高，说明~
5、原核启动子的特点如何？有什么应用？？？？
何谓启动子，原核生物启动子中有哪些特征序列，作用如何？
启动子：RNA聚合酶识别、结合并启动转录的特异DNA序列，是控制转录的关键部位。原核生物需σ因子辨认转录起始位点
原核基因转录调控特点：1、σ因子决定RNA-pol识别特异性。2、操纵子机制在原核基因调控中具普遍意义。3、特异的阻遏蛋白与阻遏机制具普遍性。CAP正性调节作用、协调调节（阻遏蛋白与CAP）

论述题（11分/题）：
1、实验中如何筛选出含有DNA重组体的宿主细菌？
*重组体筛选和克隆基因的表达/*重组体阳性菌株的筛选
鉴定哪一菌落或噬菌斑的重组DNA分子带有目的基因的过程称~
直接筛选法：1. 药物抗性检测；用于细菌, 真菌, 植物和动物细胞的各种抗生素抗性基因--若克隆载体携带某种抗菌性标志基因，转化后只有含这种抗菌基因的子细菌，才能在含该抗生素的培养板上形成菌落；2）标志补救：转化或转染的外源基因表达产物可弥补基因缺陷性宿主菌的性状；3）分子杂交：对于整合型载体, 则应该利用DNA杂交或RNA杂交法证实：用探针与DNA克隆片段进行杂交，直接选择鉴定。
免疫学方法：利用特异抗体，与目的基因表达产物作用，进行筛选，包括免疫化学和酶免疫检测分析。鉴定目的基因的特异表达产物，特异性强、灵敏度高，适用于筛选无任何选择标记的基因
2、DNA聚合酶、拓扑酶、连接酶各有何功能？描述一个须要这三种酶同时作用的代谢过程。
拓扑异构酶复制时能松解并理顺DNA超螺旋结构的E，改变DNA拓扑学构象；兼内切酶、连接酶作用
DNA连接酶催化相邻单链DNA片段连接，磷酸二酯键；条件：
1、一条链3’-末端有游离羟基-OH，另一条链5’-末端有磷酸基团-P
2、能量：细菌NAD+噬菌体、真核细胞ATP
3、双螺旋DNA分子
作用：复制终止结合缺口
    DNA修复、重组、剪接缝合缺口
    基因工程的常用酶
DNA-polA。5’-3’聚合磷酸二酯键;填补空隙B。5’-3’外切酶切除引物、突变片段C。３`-5`外切酶-校读
**原核生物与真核生物DNA复制的基本过程
1．复制的起始
1）解旋：DnaABC
DnaA蛋白辨认、结合到复制起始点上。
DnaB（解螺旋酶）在DnaC协助下结合于初步打开的双链，并且逐步置换出DnaA。
2）复制叉：拓扑异构酶、解旋酶、SSB
SSB使DNA保持开链状态。
3）引发体：引物酶DnaG进入与DnaB、DnaC、在DNA起始复制区，形成引发体。
4）引物：由ATP供应能量。当引发体到达适当位置，模板的配对序列，引物酶催化NTP聚合，生成RNA引物。同时拓扑酶Ⅱ消结或松弛螺旋。
2．复制延长
⑴聚合子代DNA：DNA聚合酶，以亲代DNA链为模板，从5'→3'聚合子代DNA链。
⑵引发体移动：移动，解旋，形成新的复制叉；随从链重新合成RNA引物。
3．复制的终止
⑴去除引物，填补缺口：引物RNA被水解，填补缺口；⑵连接冈崎片段：DNA连接酶连接冈崎片段；⑶真核生物端粒的形成：线性DNA复制完成后，其末端由于引物RNA的水解可能缩短。需在端粒酶催化下延长。端粒酶是一种RNA-蛋白质复合体，它以RNA为模板，通过逆转录过程对末端DNA链进行延长。
1、        乳糖操纵子的结构和功能。 04级生化也重复.

2、        请列举三种基因沉默技术.
基因沉默：1、指基因组中的基因，由于内在遗传因素或外源基因，而表达降低或完全不表达。
2、基因沉默是基因表达调控的一种重要方式，是生物体的本能反应；生物体在基因调控水平上，通过基因沉默限制外源核酸入侵；
3、基因沉默还与个体生长发育有关--通过控制内源基因的表达来调控生长发育。
基因沉默应用：1.在基因工程中克服基因沉默，使外源基因更好表达2.利用基因沉默抑制某些有害基因的表达，治疗疾病3.有选择地使某些基因沉默，可测知其功能4. 通过抑制生物代谢过程中的某个环节, 以获得特定代谢产物
常见基因沉默技术：反义RNA技术、核酶技术、三链DNA技术、肽核酸技术、基因敲除技术、RNA 干扰技术
05名词解释
1.S-D序列（核蛋白体结合位点）原核mRNA起始密码AUG上游富含嘌呤-AGGA-序列，可与核糖体小亚基上16SrRNA3’结合，促使小亚基在mRNA上定位。
2.外显子断裂基因及初级转录产物出现并表达为成熟RNA的核酸序列
3.KLENOW片段
4.操纵子原核生物一个转录区段，转录单位，包括若干个结构基因及其上游调控序列。
5.管家基因(housekeeping gene)在一个生物个体生命全过程所必须，几乎所有细胞中持续表达，维持细胞基本生存需要，又称基本基因表达；其表达只受启动子、RNApol作用，不受其他机制调节，无时空特异性。如rRNAtRNA基因、三羧酸循环酶基因
6.PCR聚合酶链反应-polymerase chain reaction
在体外特异、迅速地扩增特定靶DNA序列的方法
反应体系：四种Dntp、耐热DNA聚合酶、模板DNA、Mg2+
反应过程：变性→复性/退火→延伸引物
优点：敏感、特异性强、操作简单
PCR的应用： 1、目的基因克隆：快速方便地获得目的基因
2、基因体外诱变：随意设计包含突变序列引物，在体外进行基因的嵌合、缺失、点突变等改造3、DNA微量分析：快速敏感地扩增被测试的目的基因，广泛应用于病原微生物基因检测、遗传病、癌基因的基因诊断、法医学鉴定、DNA序列分析。
*常见PCR衍生技术：1、逆转录PCR--以RNA为模版2、原位PCR--在细胞内或染色体上3、定量PCR--加入荧光标记探针，为实时定量
7.蛋白质组学生命现象体现者是蛋白质，蛋白质有自身的特定活动规律，~是一门从整体水平上研究细胞内蛋白质的组成、活动规律的新兴学科。
简答题
1.简述DNA复制保真机制①严格碱基互补配对②复制过程DNA-pol对碱基的选择能力③DNA-pol校读作用（DNA-pol３`-5`外切酶活性）
2.简述基因治疗的基本程序向有功能缺陷的细胞，导入健康外源基因，以纠正、补偿基因缺陷。广义：利用基因工程方法，纠正、治疗异常基因
分类：体细胞~、生殖系统~、增强基因工程、优生基因工程
方法：修复、替换、添加、直接基因治疗、基因药物、转基因动物
临床应用：肿瘤的~、艾滋病~、遗传病~；
如转基因治疗血友病：导入凝血因子Ⅸ基因的转基因绵羊，分泌的乳汁中含丰富的凝血因子Ⅸ，能有效地用于乙型血友病的治
4.简述白喉毒素的作用机制

论述题
1.根据基因工程技术,如何利用大肠杆菌提取具活性的重组蛋白质.
2.举一个例子,RNA和蛋白质结合的酶,论述其结构和功能,
具有酶活性的RNA；具有锤头结构，四膜虫rRNA可自我剪接。有催化部份和底物部份，共同组成锤头结构
除rRNA外，tRNA、mRNA也可自我剪接。
*核酶研究的意义
*核酶的发现是对传统酶学的挑战；
*设计合成人工核酶—小片段RNA—siRNA用于基因干扰技术，破坏病毒核酸，进行基因治疗。

06生化期末
名解
3.中心法则
4.基因组学：对所有基因进行基因组作图，包括遗传图谱、物理图谱、转录本图谱，核苷酸序列分析、基因定位、基因功能分析的学科
38 TFⅡD
酵母杂交技术的作用
A 筛选相互作用的DNA分子  B 筛选相互作用的核酸  C筛选可能相互作用的蛋白质 D 筛选未知的新蛋白质
名解18分
NPN
siRNA:P250:small interference RNA在RNA干扰技术中，导入细胞的dsRNA降解成约22个核苷酸长度的siRNA;siRNA可通过碱基互补配对和靶mRNA结合，降解mRNA;同时可以利用体内转录系统生成下一代siRNA,产生放大效应、长期效应。
冈崎片段：由于DNA两条链复制方向都是5’-3’导致半不连续复制，两条链中的领头连可以连续复制，另外一条随从链需等复制叉移动一段距离后再进行复制，复制时不连续进行的，这些不连续的片段称为～
分子伴侣在新生肽链折叠中，能接到其他蛋白质正确装配成有
顺式作用元件