●定义:存在抗原表面决定其抗原特异性的特定化学基团。●组成：
●抗原结合价：抗原决定簇的总数.
4．细菌的抗原：
5.共同抗原与交叉反应
共同抗原（多种复杂Ag系统中共有的抗原，又称类属抗原/交叉反应性Ag）
(二)抗体（antibody, Ab）
1．定义：在Ag刺激下产生一类能够与该Ag发生反应的免疫球蛋白（Ig）。
Ab特征：
1 脊椎动物的浆细胞；②Ag刺激；③与相应Ag特异性结合；
④化学本质是一类具有免疫功能的球蛋白。
2．免疫球蛋白的基本结构
●链： H链，L链●区：V区，C区，铰链区
●类：IgG， IgA， IgM， IgD， IgE，● 亚类：
●型：λ和κ型●肽链的a.a数：
● IgG的酶解和化学分解片段
Fab（抗原结合片段）； Fc（可结晶片段）
●Ig的体和抗原结合价：
单体——2价；双体——分泌型IgA （4价）；五体——IgM（5价）
● Ig的功能区（domain）
抗原结合部位由VL、CL、VH、CH四个功能区组成
● Ig的构象变化
Ig分子在未与Ag结合时，呈“T”形，当Fab与Ag结合后，通过柔软的铰链区的弯曲，变成“Y”形。补体结合部位暴露。
4．产生抗体细胞的激活和抗体的形成
●相关的细胞表面标志和受体
----MHCII：主要组织相容性复合物II（抗原呈递）
-----TCR：T细胞受体（识别特异性抗原）
----CD4：T细胞表面抗原（识别MHCII）
抗体细胞的激活和抗体的形成
1.Mф 的抗原呈递作用；2.B细胞的激活；3.浆细胞产生抗体
（1）巨噬细胞：处理和传递抗原，但无特异性识别抗原的功能 。
（2）T细胞：在抗体形成过程起调节细胞的作用，有特异性识别抗原作用。
（3）B细胞：产生抗体的效应细胞，有特异识别Ag的功能。
5.机体产生抗体的一般规律
初次应答：再次应答：
6.抗体形成的机制
● Burnet的克隆选择学说 识别•记忆•自身禁忌抗体的多样性
7．淋巴细胞杂交瘤技术与单克隆抗体（McAb）
McAb:纯系B淋巴细胞克隆产生的单一成分、单一特异性 的免疫球蛋白。
淋巴细胞杂交瘤制备技术（略）
McAb的应用
●生物导弹●疾病的快速准确诊断
●高纯度药物制备●微量成分检测分析
§4 免疫方法及应用
一、抗原抗体的主要反应
●凝集反应：颗粒性抗原与相应抗体产生可见凝集块的反应。
●沉淀反应：可溶性抗原与相应抗体产生可见沉淀物的反应。
补体结合实验：Ag+Ab+C+E+溶血素
二.免疫标记技术
酶联免疫吸附法（ELISA）
●基本原理●标记物和 底物（如HRP和DAB）
●方法------双抗体夹心法 （测Ag）-----间接免疫吸附法（测Ab）
酶联免疫吸附法测定
Chap.10 微生物的分类和鉴定
●微生物分类学（microbial taxonomy）
●分类:在研究微生物相似性的基础上，把每一微生物编排在一定的分类单元中，制定出检索表。
------传统分类：形态、生化、血清-----系统分类：化石证据、RNA,DNA
●鉴定：运用现代分类系统，通过具体菌 株描述，给未知物一个具体的分类位置。
-----典型菌株（type strain）----模式种（type species）
●命名：按照国际命名法规，给每个新的分类群一个新的学名。------《国际植物命名法规》
-----《国际细菌学命名法规》
§.1 通用分类单元
（一）种的概念
●种：微生物的基本分类单位，具有许多共同特征的菌株的集合。
●亚种：Bacillus cereus subsp. mycoides●型
●菌株 （ Bacillus subtilis ACCC11060）
ATCC (美国标准菌种保藏中心）CCCMS （中国微生物菌种保藏管理委员会）
NIH （美国国立卫生研究所）NCTC （英国国立标准菌种收藏所）
二、学名的命名及有关法规
●双名法：Bacillus subtilis(属名+种名加词）
●三名法：Acetobacter pasteurianus subsp. pasteurianus
●名字的引用： Bacillus subtilis CMCC 63501
Bacillus subtilis Cohn 1874
Bacillus sp. Bacillus spp.
●缩写：Escherichia coli——E.coli
§.2 微生物在生物界的地位
● 五界系统：
●真核生物起源于原核细胞间的内共生-内共生学说
内共生学说：
● 共同起源，同一主先；●细菌、古生菌先于真核生物产生；
● 古生菌吞噬了朊细菌、兰细菌进化为真核生物。
● 古细菌特点： （略）
古生菌的假肽聚糖
●古生菌与细菌、真核生物膜脂结构的差别
CH2OH
HC--0--C-CH2-(CH2)13-CH3 (细菌，真核生物）
CH2 O
细菌、真核生物：甘油-酯键---脂肪酸）
CH2OH
HC-0-C-CH2-CH-(CH2)3- CH2-CH-(CH2)3 CHCH3
C H2 CH3 CH3 CH3
(古生菌：甘油-醚键-植烷基型碳水化合物)
§.3 各大类微生物的分类系统纲要
一、细菌、古生菌分类系统纲要
《Bergey’s Manual of Systematic Bacterialogy》1,2版
《Bergey’s Manual of Determinative Bacterialogy 》1~9版
1.古生菌：《系统手册 》（二版，2000年--）
原核生物 ----古生菌界（2门63属208种）----泉古生菌门---广古生菌门----细菌界
2.细菌的分类
●《系统手册 》（一版，1984~1989年，共4卷）

卷 类型 群（Section） 主要代表
Vol. 1 G- 1~11 section 肠杆菌，假单孢菌，
Vol. 2 G+ 12~17 section 芽孢杆菌，梭菌，
Vol. 3 古生菌等 18~25 section 甲烷菌，嗜盐菌，
光合细菌Vol. 4 产孢放线菌 26~33 section 链霉菌
3.真菌（Fungi）的分类系统
●Ainsworth系统
《 The fungi 》, Ainsworth, 1973
《 Ainsworth and Bisby’s Dictionary of the Fungi》
----7版，1983年，Hawksworth----8版，1995年， Hawksworth
真菌界5个亚门的分类特征（略）
§.4 微生物分类鉴定方法
1、 经典分类鉴定方法（略）
二、现代分类鉴定方法
1．微生物遗传型的鉴定
（1）DNA碱基比例的测定 （G+C）mol%：
●测定方法：解链温度法（Tm值法）
●特点：
----(G+C)mol%值只能做否定判断；----（G+C）mol%值差别>5，属不同的种；
差别>10，属不同的属。
（2） 核酸分子杂交法(DNA-DNA杂交)
● DNA-DNA分子杂交法原理：DNA分子解链的可逆性和碱基配对的专一性。
DNA-DNA杂交（固相杂交法）
单链DNA（待测菌株）

转硝酸纤维素膜——加入放射性标志参照菌DNA杂交（单链）——洗去未杂交DNA——闪烁计数器计数
结论：
1. DNA同源性≥ 60%——（同种）2. DNA同源性≥ 70%——（同亚种）
3. DNA同源性60~ 70%——（不同亚种）4. DNA同源性20~ 60%——（同属）
16s rRNA分析作为细菌进化的 计时器
●生物共有的●一定的信息量（1542个核苷酸）
●一定的保守性●便于比较研究
（3）16s rRNA寡核苷酸编目分析
待测菌株rRNA（放射标志）——RNA酶水解——双向电泳——寡核苷酸系列 （6个以上核苷酸） ——测序→求SAB
（4）16s rRNA核苷酸序列分析
● DNA-PCR法
提取DNA——PCR扩增16SrRNA基因——PCR产物纯化分析——16SrRNA基因序列测定
●相似性结果判断：
1. SAB≥95 %——同种2. SAB为85~95%——同属3. SAB≤85 %——不同属
已知序列的ｒＲＮＡ分类表（--1998.8）
序列 真核生物 古细菌 细菌 质体 线粒体 合计
LSUrRNA* 96 31 213 51 217 608
5ＳrRNA 1318 60 439 63 9 1889
SSUrRNA 3166 324 7336 120 601 11547
LSUrRNA:大亚基核糖体rRNA；SSUrRNA：小亚基核糖体rRNA
2．细胞化学组分的鉴定
细胞结构 成分
壁 肽聚糖、化学组分
膜 枝菌酸（棒杆菌酸；分枝菌酸）甲基萘醌
全细胞 水解糖类
1.细胞壁化学类型（分为9种类型）
----- 氨基酸：DAP、Gly、Lys、Asp、Orn----糖类：阿拉伯糖、半乳糖
● 测定方法：TLC （薄层层析法）
（2）全细胞水解液的糖型
糖类型 特征糖类
A 半乳糖、阿拉伯糖、
B 马杜拉糖
C 无特征糖类
D 木糖、阿拉伯糖
E 半乳糖
主要放线菌属的细胞壁类型和全细胞水解糖类
属 细胞壁化学类型 全细胞水解糖类
Streptomyces I（L-DAP；Gly） C（无特征糖类）
Micromonospora II（Meso-DAP；Gly） D（阿拉伯糖，木糖）
3．数值分类法
（1）菌株选择（OUT-操作分类单位）（2）选择实验项目
（3）数字编码（4）计算机分析
------ 相似系数的计算；
结果分析：
1. S （相似值）≥85%——（同种）
2. S （相似值）≥65%——（同属）
3. S （相似值）≤65%——（亲缘关系较远）
●数值分类法与传统分类法的比较 （略）