12.蛋白质测序策略:①测定蛋白质分子中多肽链的数目②拆分蛋白质分子中的多肽链③断裂多肽链内的二硫键④测定每一多肽链的氨基酸组成⑤鉴定多肽链的N末端和C末端残基⑥断裂多肽链成较小的肽段⑦测定各个肽段的氨基酸顺序⑧确定肽段在多肽链中的顺序，利用重叠肽重建完整多肽链的一级结构⑨确定多肽链中的二硫键的位置。
分离纯化某一特定蛋白质的一般程序:前处理，把蛋白质从原来组织或细胞中以溶解的状态释放出来，并保持原来天然状态和生物活性，一般通过细胞破碎，方法有超声波破碎、砂研磨、高压挤压或溶菌酶处理。粗分级分离，获得提取液之后，选择一套适当方法将所要的蛋白质与其他杂蛋白分离开，一般方法有盐析、等电点沉淀和有机溶剂分级分离等。细分级分离，进一步纯化，一般用层析法包括凝胶过滤、离子交换层析、吸附层析以及亲和层析等。结晶，使蛋白质处于过饱和状态，然后适当控制温度、加盐盐析、加有机溶剂或调pH值等方法达到结晶条件。结晶中不发生变性，接入晶种可加速结晶过程，重结晶可进一步纯化。
蛋白质的纯度鉴定通常采用分辨率高的物理化学方法，例如PAGE、等电点聚焦、毛细管电泳、沉降分析和HPLC等。如果制品是纯的，在这些分析谱上只呈现一个峰或一条带。
13.脂肪酸合成。乙酰-CoA是脂肪酸分子所有碳原子的唯一来源，它来自糖的氧化分解或氨基酸的分解。这些过程是在线粒体中进行的，但脂肪酸合成却在细胞溶胶中，因此细胞必须把乙酰-CoA借助柠檬酸-丙酮酸循环自线粒体转移到细胞溶胶中。脂肪酸对生物体有四种重要功能:①是磷脂和糖脂的组成单元，这些分子又是生物膜的组成成分②它与糖蛋白的蛋白质共价连接，经修饰的糖蛋白在脂肪酸残基的引导下指向膜的靶标位置③脂肪酸是燃料分子，是单位质量含能量最多的储能物④脂肪酸的某些衍生物担当着激素及胞内信使的职能，所以必须合成脂肪酸。脂肪酸合成步骤:①启动:乙酰-CoA经乙酰-ACP转化为乙酰-合酶。②装载:丙二酰-CoA转化为丙二酸单酰ACP。③缩合:乙酰合酶与丙二酸单酰ACP缩合形成乙酰乙酰-ACP。④还原:将乙酰乙酰-ACP还原为β-羟丁酰-ACP。⑤脱水:将β-羟丁酰-ACP脱水为α，β-反式-丁烯酰-ACP。⑥还原:将α，β-反式-丁烯酰-ACP还原生成丁酰-ACP。至此，每一循环脂肪链延长了两个碳原子，如此反复循环进行，例如生成16个碳的软软脂酰-ACP。实行⑦释放:软脂酰-ACP水解，生成软脂酸。
14.许多物质代谢最终都可形成乙酰-CoA，例如葡萄糖、丙酮酸、乙醛、乙酸及脂肪酸等。乙酰-CoA的产生途径:①糖酵解产生的丙酮酸在进入三羧酸循环之前，氧化脱羧生成乙酰-CoA。②脂肪酸的β-氧化一次脱下两个碳原子形成乙酰-CoA。③氨基酸转氨基生成丙酮酸进而形成乙酰-CoA，生酮氨基酸转变为乙酰乙酰-CoA形成乙酰-CoA，氨基酸直接形成乙酰-CoA。乙酰-CoA的去路:①乙酰-CoA进入三羧酸循环彻底氧化分解产生能量，合成ATP。②乙酰-CoA在胞质中参与脂肪酸的合成，③作为胆固醇的前体生成胆固醇。④乙酰-CoA转移酰基参与氨基酸的合成。⑤转化为乙酰乙酸生成酮体，氧化供能。
脂肪酸的β-氧化:①活化，脂肪酸在硫激酶(又称脂酰辅酶A合酶)作用下形成脂酰-CoA。②脂酰-CoA的氧化，羧基邻位被脂酰-CoA脱氢酶作用，脱下2个氢转化为反式△2-烯酰-CoA，同时产生FADH2。③水合，反式△2-烯酰-CoA水合形成3-羟脂酰-CoA，由烯酰-CoA水合酶催化。④氧化，L-3-羟脂酰-CoA在L-3-羟脂酰-CoA脱氢酶作用下脱氢转化为3-酮脂酰-CoA，并产生NADH。⑤3-酮脂酰-CoA受第二个CoA作用发生硫解，断裂为乙酰-CoA和一个缩短了2和碳原子的脂酰-CoA，由β-酮硫解酶作用。缩短了的脂酰-CoA又进入下一轮的β-氧化，直到全部变为乙酰-CoA。
15.体外获得克隆DNA方法，聚合酶链式反应(PCR)。基本步骤:①选出将要扩增的DNA片段(人工分离或合成)②设计DNA片段两端的引物，并尽量减少可能产生的非特异产物。③优化反应体系，以便获得更好的扩增效果。体系包括适量的模板、4种dNTP、TapDNA聚合酶和适量Mg离子。④选择3个温度进行热循环。3个温度分别为:变性94。C，45～60秒；退火1min，温度根据引物与模板的Tm值来决定，一般为两引物中较低的Tm值减2，即退火的温度约比引物变性温度低2~3度；延伸，72。C，1min；热循环25～30周期，最后延伸10min。⑤扩增完后，取出一定量反应产物，检测扩增结果。
体内获得克隆DNA方法，重组噬菌体载体克隆DNA。①获得克隆的目的DNA片段，②选择噬菌体载体并制取噬菌体DNA，③用限制酶切除去掉噬菌体DNA中复制和装配非必须的DNA序列，④将外源DNA连接到噬菌体DNA被切去部分的缺口处，形成重组DNA分子，⑤重组DNA分子(含有cos位点)和外壳蛋白在体外进行包装形成成熟重组噬菌体，⑥用重组噬菌体感染宿主细胞获得增殖，⑦分离裂解噬菌体，提纯DNA，获得目的克隆。
★克隆载体要求:①具有自主复制能力，②携带有易于筛选的选择标记，③含有多种限制酶单一识别序列，以便外源基因插入，④载体应尽可能小，便于导入细胞和进行繁殖，⑤使用安全。
16.酶作用的调节或控制，包括酶活性的调节和酶含量的调节。酶的活性调节除了条件外的影响调节还包括别构调控、酶原的激活和可逆的共价修饰三种。别构调控是酶分子的非催化部位与某些化合物可逆的非共价结合后发生构象的变化进而影响酶的活性，典型的例子3-磷酸甘油醛脱氢酶。酶原的激活是体内合成出不具有活性的酶蛋白的前体，经过蛋白酶水解后构象发生变化形成酶的活性部位，变成活性蛋白。典型的例子如消化系统中的酶原激活的胃蛋白酶、胰凝乳蛋白酶等，还有凝血机制中的凝血酶。可逆的共价修饰是通过共价调节酶对酶的多肽链上某些基团进行可逆的共价修饰，使酶处于活性与非活性的互变状态，从而调节酶活性。例子如磷酸化酶、腺苷酰化酶、尿苷酰化酶、甲基化酶等。①通过改变酶的活性进行调节。通过加入激活剂对酶活性的激活，加入抑制剂来对酶活性的抑制，改变反应条件如调节pH、温度等来影响酶的活性。②改变酶反应中反应物或者底物的浓度，使酶反应能够趋向正或者负方向进行反应以此来调节酶作用。酶作用变化的表征，测定酶反应速度，酶的活力，酶的比活力，酶的Km值，酶的转换数kcat等。测定方法用米氏方程，或者通过双倒数作图法来确定Vmax、Km等参数，进而推算出其他的酶参数。