17.琼脂糖凝胶电泳分离DNA基本步骤:①琼脂糖凝胶的制备，称取琼脂糖，加入到0.5×TBE溶液中加热配成1%琼脂糖凝胶，稍凉后加入几滴EB倒入凝胶板中凝固。②加样，将DNA样品加入缓冲液混匀后，用微量移液器依次加入到加样孔中。③电泳，电压维持在5V/cm，当溴酚蓝移动至凝胶阴极约3/4处时停止电泳。④染色，用溴化乙锭染色。⑤观察，在254nm或300nm波长紫外灯下观察，并照相记录。(①配制缓冲溶液，pH多在6~9之间，离子强度为0.02~0.05、②制板，常用琼脂浓度1%~1.5%,与等体积预热之60度的缓冲液混合，制成琼脂板约为3mm、③点样、④电泳、⑤固定和染色，70%酒精配制的2%醋酸溶液固定15~20min，烘干)
★18.肾上腺素、胰高血糖素对糖原的代谢调节。哺乳动物在遇到危险时，通过大脑皮层产生的兴奋，作用于肾上腺，使肾上腺素分泌增加，肾上腺素结合到专一性的β-肾上腺素特异受体上触发后续的环化酶活化。G蛋白与专一的受体偶联而被活化，将信息传递给腺苷酸环化酶，然后环化酶催化ATP产生cAMP，再触发一系列由cAMP介导的级联反应。cAMP激活蛋白激酶，蛋白激酶又使磷酸化酶激酶磷酸化而活化，引起肝糖原和肌糖原的分解产生葡萄糖，葡萄糖进入血液提高血糖浓度，为机体提供充足的能量以应对危险的状况。在饥饿时机体血糖降低可引起胰高血糖素分泌增加，此时细胞内cAMP含量增加，促使有活性的a激酶增加。a激酶一方面使糖原合酶磷酸化失去活性，一方面通过磷酸化酶b激酶使磷酸化酶变成有活性的磷酸化酶a，最终结果是糖原合成减少，分解增加，使血糖升高。胰高糖素主要通过提高靶细胞内cAMP含量达到调节血糖浓度的目的。细胞内的cAMP可激活依赖cAMP的蛋白激酶，后者通过酶蛋白的共价修饰改变细胞内酶的活性，即①激活糖原分解和糖异生的关键酶，促进肝糖原分解成血糖，促进糖异生作用。②抑制糖原合成和糖氧化的关键酶，使血糖升高。低血糖、低氨基酸可刺激胰高血糖素释放。胰高血糖素主要促进肝糖原的分解，级联放大作用与肾上腺相同。
18.组氨酸电离方程式：
 
19.DNA复制的基本活动包括:①双链的解开(解旋的前提下)；②RNA引物的合成；③DNA链的延伸；④切除RNA引物，填补缺口，连接DNA片段；⑤切除和修复错配碱基。
20.DNA的损伤修复系统有五种:错配修复(mismatch repair)、直接修复(direct repair)、切除修复(excision repair)、重组修复(recombination repair)和易错修复(error-prone repair)。错配修复系统能够识别错配位点以及“新”“旧”链，将错配新链切除并加以修复。光复活是直接修复的一种方式，它分解紫外线引起的嘧啶二聚体，但高等哺乳动物没有。切除修复即是在一系列酶的作用下，将DNA分子中受损伤部分切除掉，并以完整的那一条链为模板，合成出切去的部分，然后使DNA恢复正常结构的过程。从同源DNA的母链上将相应核苷酸序列片段移至子链缺口处，然后用再合成的序列来补上母链的空缺的修复称为重组修复，又叫复制后修复。DNA损伤或抑制复制均能引起一系列复杂的诱导效应，称为应急反应(SOS)。SOS可反应诱导产生缺乏校对功能的DNA聚合酶，进而导致高错误频率的DNA修复，称为易错修复。
22.糖异生作用是指以非糖物质作为前体合成葡萄糖的作用。非糖物质包括乳酸、丙酮酸、丙酸、甘油以及氨基酸等。不是糖酵解的逆反应，糖酵解有三步反应不可逆，己糖激酶催化葡萄糖和ATP形成G-6-磷酸和ADP、磷酸果糖激酶催化果糖-6-磷酸和ATP形成果糖-1,6-二磷酸和ADP、由丙酮酸激酶催化的磷酸烯醇式丙酮酸和ADP生成丙酮酸和ATP。糖酵解采用迂回措施:一、丙酮酸通过草酰乙酸形成磷酸烯醇式丙酮酸。通过丙酮酸羧化酶催化消耗一分子ATP，以生物素为辅基，形成草酰乙酸；草酰乙酸在磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶催化下生成磷酸烯醇式丙酮酸。二、果糖-1,6-二磷酸在果糖-1,6-二磷酸激酶催化下其C1位的磷酸酯键水解形成果糖-6-磷酸。三、葡萄糖-6-磷酸在葡萄糖-6-磷酸激酶催化下水解为葡萄糖，需Ca离子协同作用。
糖异生的调节:葡萄糖、乳酸的浓度，和糖酵解有密切相互协调关系。磷酸果糖激酶和果糖-1,6-二磷酸酶的调节。丙酮酸激酶、丙酮酸羧化酶和磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶之间调节。

★1. 构建基因工程菌的基本过程是什么？
答: 1.目的基因的获取获取目的基因是实施基因工程的第一步。目的基因的获取方法主要有两种：
①从自然界中已有的物种中分离出来 ②用人工的方法合成。
2.PCR技术扩增目的基因
3.基因表达载体的构建基因表达载体的组成：目的基因、启动子、终止子、标记基因
4.将目的基因导入受体菌
5.目的基因的监测与鉴定

★2. 怎样设计一个表达载体？
答: 大致步骤为:提取质粒--酶切--连接--导入--控制表达。 表达载体四部分：目的基因、启动子、终止子、标记基因。常用细菌质粒进行构建，构建过程中运用限制性核酸内切酶切割出与目的基因相合的末端（多为黏性末端，也有平末端），采用DNA连接酶连接，导入生物体实现表达。标记基因可帮助识别质粒并检测是否成功整合到染色体DNA中。三种最常用的载体是细菌质粒、噬菌体和动植物病毒。
必备条件 :
①在宿主细胞中能保存下来并能大量复制，且对受体细胞无害，不影响受体细胞正常的生命活动
②有多个限制酶切点，而且每种酶的切点最好只有一个，如大肠杆菌pBR322就有多种限制酶的单一识别位点，可适于多种限制酶切割的DNA插入
③含有复制起始位点，能够独立复制；通过复制进行基因扩增，否则可能会使重组DNA丢失
④有一定的标记基因，便于进行筛选。如大肠杆菌的pBR322质粒携带氨苄青霉素抗性基因和四环素抗性基因，就可以作为筛选的标记基因。一般来说，天然运载体往往不能满足上述要求，因此需要根据不同的目的和需要，对运载体进行人工改建。现在所使用的质粒载体几乎都是经过改建的。
⑤载体DNA分子大小应合适，以便操作。
基因克隆的载体类型：质粒载体，噬菌体载体，柯斯质粒载体，M13噬菌体载体，噬菌粒载体。

★3. 2-D电泳（双向电泳）关键步骤:
a. 样品制备 (蛋白提取)(1) 细胞培养、处理和收集;(2) 将细胞在 IEF 裂解缓冲液中溶解;(3) 将样品离心以去除不溶的细胞碎片和 DNA，提取上清，-80 ℃保存。