2. 水质粪便污染指示菌及其检测

粪便指示污染菌：采用易检出的肠道细菌作为指示菌，取代对致病菌的直接检测。

大肠菌群：多管发酵法和滤膜法

3. 土壤微生物的检测

包括样品的采集，多采用五点取样法和样品的稀释。

4. 空气微生物的检测

1 自然沉降法：利用空气微生物粒子的重力作用，在一定时间内将生物粒子收集到带有培养介质的平皿内，对在适宜温度下（37℃，24h）培养生长的菌落进行生物学观察和研究，计算出空气微生物的粒子浓度，后对空气微生物进行分离纯化，进行检验和鉴定。

2 惯性撞击式采样法

利用抽气装置在单位时间内将一定容量的含有微生物粒子的空气，通过某些装置形成直线或曲线运动的高速气流，使气流中微生物粒子也随之高速运动，当气流改变方向时，运动着的粒子因惯性继续照直前进撞击并黏集于采集面上。

3 过滤阻留式采样器

利用抽气装置，使空气通过滤材，微生物粒子被阻留在滤材上，供进一步分析。

4 静电沉着类采样器

利用高压静电场，使空气中的微生物粒子带上一定量的电荷后被带相反电荷的采集面所吸附，使空气微生物采集下来。

8、什么是生物修复，生物强化？请列举几种生物修复的方法并简要说明其原理。（2008,15分）

生物修复是指利用生物的生命代谢活动减少存在于环境中有毒有害物质的浓度或使其完全无害化，从而使环境污染能够部分或完全恢复到原来状态的过程。

生物强化是指通过向传统的生物处理系统中引入具有特定功能的微生物，提高有效微生物的浓度，增强对难降解有机物的降解能力，提高其降解速率，并改善原有生物处理体系对难降解有机物的去除效能。

生物修复技术大致可以分为原位生物修复、异位生物修复和联合生物修复。原位生物修复是指在基本不破坏土壤和地下水自然环境的条件下，对受污染的环境不作搬运或输送，而在原产直接进行生物修复，如空气注射法、生物冲淋法、土地耕作法、可渗透反应强法等。异位生物修复是指移动污染物到邻近地点或反应器内进行。联合生物修复是指将不同的修复方法进行组合，如曝气井和抽提井组合工艺、化学微生物反应墙原位联合修复工艺等。

9、请从碳源、电子共受体、最终产物的角度论述好氧异氧菌、好氧自养菌、硫酸盐还原菌、反硝化菌及产甲烷菌的不同所在。（2008,15分）

硫酸盐还原菌 (Sulfate-Reducing Bacteria，简称SRB) 是一种厌氧的微生物。广泛存在于土壤、海水、河水、地下管道以及油气井等缺氧环境中

反硝化细菌是一种能引起反硝化作用的细菌。多为异养、兼性厌氧细菌，如反硝化杆菌、斯氏杆菌、萤气极毛杆菌等

10、 试论述酶工程研究的主要任务，酶分离纯化的主要方法，酶在环境工程应用中面临的主要问题，并试举例说明目前环境污染治理过程中应用的几种热点酶的名称和用途。（2008,15分）

酶制剂在处理污水中，具有高效专一，整个处理过程耗能低，无二次污染，操作简单，易控制等特点。随着低成本、高活力的酶制剂的大量出现和酶的生产、分离纯化、酶及固定化酶反应器，酶与固定化酶的应用技术的不断提高，酶制剂在环境保护方面的应用一定会具有较大的发展潜力。

酶分离纯化的方法：

1 盐析法

在纯化过程中，盐离子与蛋白质分子争夺水分子，减弱了蛋白质的水合程度，使蛋白质溶解度降低，从而达到分离的目的。

2 有机溶剂沉淀法

由于不同的蛋白质在有机溶剂中有不同的溶解度，故可在低温下，使用有机溶剂将目的蛋白质沉淀出来，控制温度在0℃以下进行

3 PEG沉淀法

聚乙二醇是水溶性非离子型聚合物，在溶液中形成网状结构，与溶液中的蛋白质分子发生空间排挤作用，使蛋白质分子凝聚而沉淀下来。

4 等电点沉淀法

蛋白质在其等电点（PI）处，其净电荷为零，分子间的排斥力最小，溶解度最低，易于沉淀，使目的酶与杂质蛋白分开。

5 热变性沉淀法

多数蛋白质都有遇热变性的特点，故此方法适用于热稳定酶。通过控制一定的处理温度，可使大量的杂质蛋白变性、沉淀而除去，提纯效果很好。

6 层析分离法、

利用混合物中各组分的物理化学性质（分子大小、形状、电荷、吸附力、分子亲和力等）的不同，使各组分在两相中的分布程度不同而达到分离。

7 电泳

由于蛋白质分子表面电荷的差异，应用电泳方法可将不同的蛋白质分子分离开来。

热点酶的名称及应用

单加氧酶：属氧化还原酶类，在该酶的催化下参与反应的O2分子中的O-O键断裂，一个氧原子转移到底物上合成产物，另一个氧原子则被还原为水。其分布极为广泛，几乎存在于自然界的一切生物体内，它不但能催化许多内源性底物，如脂肪酸、维生素、前列腺素等的合成与代谢，而且能有效降解多种外源毒性物质，因此对维持生物体的正常生长代谢起着极为重要的作用。

双加氧酶：芳香族污染物的危害是巨大的，用现行的物理和化学清楚方法不仅陈本高，且极易产生二次污染，因此往往放弃了对芳香族污染物的治理，微生物修复的成功总是有限的。近年来，利用植物基因工程手段，已成功地获得了对汞等重金属污染物有一定修复能力的转基因植物。利用这些双加氧酶进行有机污染物的修复已经成了研究热点。

木素过氧化物酶：可以处理很多难降解的芳香族化合物和氧化多种多环芳烃、酚类物质。

漆酶：一种含铜的胞外蛋白酶，能催化多酚、多胺基苯等底物氧化，使之生成相应的苯醌和水。因其具有降解木素，可与有毒的酚类物质作用，使苯氧基类除草剂、石油工业废水去除毒性等作用，近年来在造纸、饮料加工、环保等方面得到广泛的研究与利用。

11、 参与厌氧硝化的微生物主要有哪些，试论述其在厌氧转化过程中的作用。请从微生物类型分析两相厌氧法的基本原理、相分离实现方法。

见总结

12、 现代分子生物技术的发展为人类揭开环境污染治理中的“生物黑箱”提供了有力工具。请列举几种用于环境特异微生物检测及系统微生物群落结构的分子生物学技术，并论述及基本原理和简要步骤。

见PDF文献（分子生物学技术在环境微生物研究中的应用）